纯化

摘要： 为了制备人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)23亚型的L1蛋白,结合大肠杆菌密码子偏好性,经密码子优化合成HPV23的L1蛋白编码区序列,并将其分别克隆至原核表达载体,成功构建了4种原核表达载体pET28a-23L1、pET30a-23L1、pET32a-23L1和pESUMO-23L1,随后转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经SDS-PAGE鉴定发现,pESUMO-23L1和pET32a-23L1均能表达可溶性重组蛋白,且pESUMO-23L1的可溶性表达量较高.利用Ni-NTA亲和层析法纯化重组SUMO-23L1蛋白,纯度约为90％.血凝实验结果表明,重组SUMO-23L1蛋白具有类似天然病毒的血凝活性.

摘要： 为构建新型表面活性肽的表达载体,并探讨其在大肠杆菌中的表达及表达产物的纯化,将编码新型活性肽A_(6)K的重复DNA片段(A_(6)K)_(15)分别插入到4中不同的原核表达载体中,经酶切和测序验证后,转化到3种不同的表达宿主进行表达,通过改变异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)浓度、诱导温度和时间来优化表达条件。表达产物通过镍-次氮基三乙酸(nickel-nitrilotriacetic acid,Ni-NTA)螯合层析进行纯化,通过(A_(6)K)_(15)上的6×His与抗体特异性结合进行Western blot分析,用二喹啉甲酸(bicinchoninic acid,BCA)法测定产物浓度,进行经济效益分析。构建了含有目的基因(A_(6)K)_(15)的重组表达质粒,筛选出最优载体pET-28a-SUMO-(A_(6)K)_(15)和最优宿主BL21(DE3)。当IPTG终浓度为1.0 mmol/mL,诱导温度为30°C,时间为12 h时,表面活性肽(A_(6)K)_(15)的表达量最高,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western blot鉴定含有此新型小分子多肽(A_(6)K)_(15)。该研究成功构建了新型表面活性肽(A_(6)K)_(15)表达载体,并得到其最优表达条件,使其大量表达及纯化,为生物方法制备新型表面活性肽提供了思路。

摘要： 目的:研究云南大理宾川葡萄籽原花青素纯化及对肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法:考察了上样液质量浓度、pH、流速、乙醇体积分数等对葡萄籽原花青素吸附及解析的影响,研究AB-8型大孔吸附树脂纯化云南大理宾川葡萄籽原花青素的条件。将纯化过程中乙醇梯度洗脱得到的不同极性葡萄籽原花青素作用于HepG2细胞,采用CCK8法检测不同浓度各极性葡萄籽原花青素对肝癌HepG2细胞增殖的影响。结果:AB-8树脂纯化葡萄籽原花青素的最佳工艺为上样液pH4.0,质量浓度为6.0 mg/mL,流速为1.0 BV/h,洗脱液的体积分数为30%,洗脱体积4 BV。此纯化使葡萄籽提取物中原花青素的含量从22.77%±0.32%提高至94.73%±0.6429%,回收率为80.55%±1.6499%。以10%、20%、30%、40%乙醇洗脱的葡萄籽原花青素极性部位各浓度对肝癌HepG2细胞的增殖均有抑制作用,其中未纯化部位(即提取物未经过大孔树脂纯化)给药浓度为200μg/mL时抑制作用最为显著(P<0.001),10%乙醇组IC_(50)为25.09μg/mL,抑制效果良好。结论:云南大理宾川葡萄籽原花青素用AB-8型大孔树脂进行纯化,方法可行,该葡萄籽原花青素对肝癌HepG2细胞的增殖有较好抑制作用。

摘要： 目的为相关中成药的质量检测提供借鉴,促进含马兜铃酸中药材的合理使用。方法在传统炮制方法和配伍减毒增效的基础上,分析现代分离纯化技术在马兜铃酸减毒和富集分离纯化中的应用。结果超临界流体萃取法、分子印迹法、吸附法、液液色谱法等多种现代分离技术可用于马兜铃酸的减毒与富集分离纯化。结论现代分离纯化技术为马兜铃酸的减毒增效、富集分析等提供了多种可能。

摘要： 金针菇作为药食两用真菌,在我国的资源十分丰富。多糖是金针菇主要功能成分之一,具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抑菌、免疫调节和增加记忆等多种功能活性,研究金针菇多糖的提取纯化对金针菇综合开发应用具有重要意义。以近10年来国内发表文献(中国知网)为依据,总结概述金针菇多糖提取纯化研究进展,为金针菇多糖的深入研究及开发应用提供参考。

摘要： 预处理是生物质资源转化的关键步骤,其过程会使植物细胞壁的结构发生变化,从而降低生物质的顽固性并增强其中糖的有效溶解,以促进其高值化利用。预处理液成分复杂,所含木质素和多种降解产物不利于糖类的高效利用,需要对其进行分离纯化。以桉木经MgCl_(2)预处理的废液为对象,通过聚合氯化铝(PAC)絮凝的方法去除其中的大分子木质素,利用Zeta电位和粒径检测、高效液相色谱法、紫外光谱法等技术分析絮凝处理前后预处理液的成分变化,并对其去除机理进行深入研究。结果表明:当PAC用量为4.00%质量分数时,反应体系Zeta电位为0,此时胶体稳定性最差,可获得较大的木质素沉淀量;当预处理液的pH接近3.00时,刚好达到等电点,体系中正负电荷中和不稳定,胶体颗粒粒径最大,出现明显絮凝沉淀;随着pH的升高,PAC对木质素的去除效果仍有明显增强,综合所有因素可知,在pH为10.00、PAC用量为2.00%质量分数时,处理体系对木质素的絮凝表现出良好的选择性,木质素的选择性去除率可达86.05%。由此可知,PAC主要是通过静电和桥联双重作用改善预处理液的胶体稳定性,使预处理液中的木质素大分子优先沉淀,体现出良好的选择性,是一种非常有潜力的预处理液纯化方法,值得进一步探究和优化。

摘要： 目的探索利用昆虫杆状病毒表达系统(IBEVS)表达的重组人乳头瘤病毒(HPV)58型主要衣壳蛋白L1病毒样颗粒(VLP)的简单可行的层析分离方法。方法收集高水平表达HPV-58 L1的昆虫细胞并制备裂解上清,建立硫酸铵沉淀(ASP)联合层析法纯化L1蛋白的最佳条件,对纯化后的蛋白进行体外组装。对L1蛋白的纯化各个阶段中的组分、最终产品(纯品蛋白)及组装状态进行理化性质鉴定,分析其免疫原性。结果30%饱和硫酸铵(AS)分级分离后,L1蛋白得率为72%,纯度为9.34%;阴离子交换层析经300 mmol/L NaCl缓冲液洗脱后,L1蛋白得率>90%,纯度为13.6%;进一步经羟基磷灰石层析收获流穿液后,L1蛋白得率>80%,宿主蛋白质残留(HCPs)分析和L1蛋白的SDS-PAGE考马斯亮蓝染色显示蛋白纯度>99%。经上述3步分离纯化的L1蛋白,其总得率为55.7%,每升细胞悬浮培养液(约3.0×10^(9)个细胞)产量为57~65 mg。动态光散射(DLS)和透射电镜(TEM)分析显示,L1蛋白组装成了形状均一、直径约55 nm的VLPs。该法制备HPV-58 L1 VLPs诱导小鼠免疫系统产生的中和抗体水平与超离法制备的相当。结论本研究所建立的HPV58-L1 VLPs分离纯化方法是一套具有蛋白得率高、活性好,且操作简单等特点的成熟方案,为利用IBEVS生产成本低的HPV多价预防性疫苗奠定基础。

摘要： 通过抗原纯化试验、冻干曲线的建立,解决阻碍狂犬病冻干灭活疫苗下游工艺规模化生产的问题。病毒液纯化试验,纯化方式采用凝胶过滤柱层析技术,比较不同上样量和不同洗脱流速下狂犬病毒蛋白与杂蛋白的分离效果、杂蛋白的去除率以及纯化效率;根据狂犬病冻干灭活疫苗的耐热保护剂配方的热参数科学设计冻干程序,通过物理性状、耐老化实验、残余水分等指标筛选冻干程序。结果显示,病毒液纯化以8%柱床体积上样,30~40 cm/hr的线性流速洗脱,目的蛋白峰和杂蛋白可以实现良好分离,杂蛋白去除率能达到93%以上;狂犬病冻干灭活疫苗溶液的共晶点为-28.6°C、当预冻温度为-42°C,主干燥温度为-13°C时为最优曲线,采用该程序制备的冻干灭活疫苗产品可在37°C保存10 d。

摘要： 为研究大孔树脂纯化桑葚粗多糖的最佳工艺,考察纯化前后桑葚多糖对运动疲劳的影响。通过静态吸附-解吸试验筛选适宜树脂后,采用单因素与响应面试验确定最佳纯化工艺,并利用动物试验比较纯化前后桑葚多糖的抗运动疲劳活性。结果表明,大孔树脂纯化桑葚粗多糖的最佳工艺为:将60 mL浓度为14.5 mg/mL的粗多糖溶液以1.0 mL/min流速上样至H103树脂后,采用130 mL纯水以1.3 mL/min流速洗脱,最终产物的脱色率为78.2%±1.4%,蛋白质脱除率为67.3%±2.2%,多糖保留率为81.5%±1.2%。与粗多糖相比,纯化后的桑葚多糖可极显著延长小鼠的力竭游泳时间(P<0.01),增强其乳酸脱氢酶活力(P<0.01),并显著降低运动生成的乳酸浓度水平(P<0.05),因此具有较好的抗运动疲劳活性。

摘要： [目的]本文旨在通过建立棉铃虫效应蛋白HARP1体外表达纯化体系,对HARP1蛋白进行体外表达和纯化,为解析HARP1蛋白与植物茉莉酸信号途径中JAZ蛋白的互作分子机制奠定基础。[方法]对harp1基因序列进行密码子优化,使用蛋白预测软件预测HARP1中的信号肽和成熟肽。基于以上信息构建目的蛋白的表达质粒并进行诱导表达,使用亲和层析、酶切、透析、离子交换层析、凝胶过滤层析等方法对目的蛋白进行纯化,使用SDS-PAGE和Western blot对蛋白进行分析和检测。[结果]通过优化将harp1基因密码子适应度值(CAI)从0.39提升到0.95。蛋白预测软件预测N末端21个氨基酸为信号肽,信号肽与成熟肽切割位点在第21位丙氨酸和第22位亮氨酸之间,成熟肽为第22位亮氨酸至第122位精氨酸。构建表达质粒pETDuet1-His6-MBP-3C-HARP1(22~122),IPTG能够诱导目的蛋白表达,使用Ni-NTA柱纯化出融合蛋白His6-MBP-3C-HARP1(22~122),3C蛋白酶能够切除His6-MBP标签,使用阴离子交换柱成功分离His6-MBP标签和HARP1(22~122)蛋白,使用Superdex 200 increase Gel Filtration Column进一步纯化获得单体HARP1(22~122)蛋白。[结论]成功建立HARP1蛋白体外表达与纯化体系。

摘要： 经发酵得到树舌灵芝发酵全液，经提取得到粗多糖,对得到的粗多糖进行分级、纯化得到纯度较高的多糖样品，测定药理活性。树舌(Ganoderma applanatum)隶属真菌门(Eumycota)，担子菌亚门(Basidiomycotina),层菌(Hymenomycetes)，灵芝目(Ganodermatales)，灵芝科(Ganodermataceae)，灵芝属(Ganoderma)。rn 树舌为药用菌,性平，味苦,能祛风除湿，清热，止痛，化积，止血，化痰，民间多用以治疗急慢性肝炎、食道癌、胰腺癌、消化道溃疡、早期肝硬化，亦可治肠血泻血、热积胸痛、神经衰弱、消化不良、风湿性肺结核等，并有滋补功用。实验用的树舌灵芝多糖通过发酵得到。取0.5cm2的菌种块5～6块接入装有200mL培养基的500mL容量瓶中。接种后，在摇床上120r/min、25°C，振荡培养5d，作为液体菌种备用。30L发酵罐装培养基70％，高压蒸汽灭菌，接入液体菌种，接种量为10％，于25°C培养7d。第七天对发酵液进行处理，离心，浓缩，醇沉即得粗多糖。称取一定量的粗多糖，用sevage法除蛋白。粗多糖溶液加人sevage试剂(氯仿：正丁醇=4：1混匀)，使白质尽可能变性，反复除四五次蛋白，分离，获得下层的水溶液，此水溶液即为多糖溶液。用过氧化氢法除色素,在450C水浴中加入H2O2，使其颜色变为淡黄色。然后继续水浴使其H2O2分解产生的物质充分挥发掉之后，透析，冷冻干燥即为相对较纯的多糖。将冷冻干燥得到的多糖用蒸馏水溶解，配成溶液后，过葡聚糖凝胶柱(2.6×50cm),以蒸馏水为洗脱液,流速为1ml/min，自动部分收集器收集洗脱液10ml/管,以蒽酮-硫酸法测定洗脱液中多糖的含量。在10-20号管之前出现一个洗脱峰,为一个大的组分。30-35号出现一个小的组分，说明树舌灵芝多糖具有两个组分组成，并以前一个组分为主要成分。rn 发酵得到的树舌灵芝醇沉粗多糖经除蛋白、除色素、透析、冷冻干燥等得到相对较纯的多糖,经进一步分级可得分子量不同的组分，并对其组分进行活性研究。

摘要： 凝乳酶是干酪生产中的关键性酶，随着世界干酪工业的不断发展，传统来源的凝乳酶已远不能满足生产需要，各国研究者不断地寻找新的来源。MJ229是从我国传统食品江米酒酒醪中筛选得到的一株凝乳酶高产菌株。本实验利用截留分子量为60kDa和6kDa的中空纤维超滤膜对MJ229固态发酵物中凝乳酶的浸提液进行浓缩，浸提液体积被浓缩了15.6倍，凝乳酶纯化倍数达2.15倍，活力回收率为82.6％。进一步通过SephadexG-100纯化，得到电泳纯的凝乳酶，活力为2200.0U/mg，同时测得其分子量为35kDa。

摘要： 目的：研究蜘蛛香总黄酮的大孔树脂纯化工艺条件.rn 方法：采用静态吸附-解吸方法，以吸附量和解吸率为指标，筛选最佳树脂;以总黄酮收率为指标，考察最佳树脂纯化蜘蛛香总黄酮的工艺参数.rn 结果：5种树脂中，HPD600大孔树脂对蜘蛛香总黄酮纯化效果较好，其总黄酮的静态饱和吸附容量为131.11 mg·g-1干树脂，解吸率为91.69％;最佳动态吸附、洗脱条件为蜘蛛香总黄酮提取液质量浓度3.42 mg·mL-1，吸附流速2.0mL·min-1，上样量25.64mg·g-1 干树脂;吸附后的树脂柱先以3BV水洗脱，再用4BV80％乙醇以2.0mL·min-1流速洗脱，总黄酮质量分数为41.20％，收率为80.36％.rn 结论：HPD600大孔树脂在所确定的工艺条件下，可较好的分离纯化蜘蛛香总黄酮.

摘要： 根据GenBank中登录的PCV-2序列，设计一对特异性引物，扩增PCV-2去核定位信号(nuclear logalizationsignal，NLS)的Cap蛋白基因，经BarnHI和XhoI双酶切后将其克隆到表达载体pGEX-4T-1中，并转化到表达菌株Rossetta(DM3)中，采用IPTG进行诱导表达，使用GST-ProteinPurtification Kit亲和层析纯化方法对表达的GST融合蛋白蛋白进行纯化，采用SDS-PAGE薄层分析纯化效果。Western blot鉴定纯化后的重组Cap蛋白(rCap)活性.结果表明，成功克隆了无核定位信号的ORF2基因，其大小为579bp，表达的rCap蛋白大小45.3ku，与预期大小向一致;纯化后的rCap蛋白SDS-PAGE电泳检测只存在一条目的条带，纯度达到90%以上.Western blot分析表明，纯化的目的蛋白与PCV-2阳性血清发生特异性免疫学反应，具有良好的抗原性.

摘要： 为解决酸碱法精制工艺存在的三废污染严重问题，本文对二硫化碳高温萃取精制MBT新工艺进行研究,针对影响纯度的各个因素进行实验，确定精制条件为：原料配比(粗MBT：CS2)为1.5：1(w/w)，结晶初温180°C，降温速率0.5°C/min，洗液配比为1:1(/w)，洗涤2次，洗液可循环套用。

摘要： 为解决酸碱法精制工艺存在的三废污染严重问题，本文对二硫化碳高温萃取精制MBT新工艺进行研究,针对影响纯度的各个因素进行实验，确定精制条件为：原料配比(粗MBT：CS2)为1.5：1(w/w)，结晶初温180°C，降温速率0.5°C/min，洗液配比为1:1(/w)，洗涤2次，洗液可循环套用。

摘要： 本发明提供了红细胞生成素（EPO），特别是高纯形式的具有确定的糖型组成、即具有大量O-糖基化EPO同种型的重组人EPO（rhEPO）的生产方法。

摘要： 本发明涉及一种纯化设备及使用该纯化设备的纯化方法。本发明可提供一种在蒸馏原料的工序中，可通过在蒸馏塔中最大限度地利用内部热源并减少外部能量的使用来改善整个工序的能量效率的纯化设备及纯化方法。

摘要： 本发明公开了用于纯化核酸探针的纯化膜、纯化柱、纯化试剂盒和纯化方法，涉及分子生物与生物化学技术领域。本发明公开的纯化膜包括过滤膜和结合在过滤膜上用于去除核酸探针中的非特异性重复序列的锚定成分，本发明提供的纯化膜可在针对核酸探针纯化的同时消除核酸探针中的非特异性重复序列，降低非特异性背景信号的核酸探针，并有效提高核酸探针的纯度。

摘要： 本发明提供一种电化学纯化堆、电化学纯化装置及含杂质气体的纯化方法。电化学纯化堆包括：至少一个阳极极板；至少一个阴极极板；至少一个阳极电极；至少一个阴极电极；至少一个位于所述阳极电极和所述阴极电极之间的膜；至少一个位于所述阳极极板和所述阳极电极之间的阳极气体扩散层；以及至少一个位于所述阴极极板和所述阴极电极之间的阴极气体扩散层；其中，在所述阳极极板上设置有进气口和出气口，在所述阴极极板上设置有出气口。本发明所提供的电化学纯化堆由于其独特的结构设计，而具有成本低、氢气纯度高、易于操作、纯化快速的优点。

摘要： 一种沉析纤维纯化装置及其纯化工艺、沉析纤维沉析及纯化装置，纯化装置包括沉析纤维布浆口(12)、纯化腔(17)、输送装置、出料口(22)，沉析纤维布浆口(12)设置在纯化腔(17)头部，出料口(22)设置在纯化腔(17)尾部，输送装置安装在纯化腔(17)内，所述纯化腔(17)内置的输送装置将未脱水的沉析纤维从沉析纤维布浆口(12)输送至出料口(22)，且输送过程中持续喷淋洗涤沉析纤维，纯化腔(17)内设有用于喷淋洗涤的洗水喷淋孔(21)和喷淋洗涤水回用系统。整体为湿性纯化，能使沉析纤维在纯化过程中保持较高的湿度，洗涤水在物料中均匀渗透，提高纯化效率，使得洗涤更均匀彻底。

摘要： 从粗制双(氟磺酰基)亚胺锂(LiFSI)中去除目标杂质以制备纯化的LiFSI产物的方法。在一些实施方案中，纯化方法包括使粗制LiFSI与第一无水有机溶剂接触，以产生包含LiFSI和目标杂质的溶液，其中LiFSI是可溶的，并且杂质是基本上不溶的。在一些实施方案中，向溶液中添加第二无水有机溶剂以使目标杂质沉淀，然后将其过滤以获得滤液。在一些实施方案中，从滤液中去除溶剂以获得包含LiFSI的固体物质，然后将其与第三无水有机溶剂接触，LiFSI不溶于所述第三无水有机溶剂。然后可以从第三无水有机溶剂中分离LiFSI以获得纯化的LiFSI产物。还公开了纯化的LiFSI产物和利用纯化的LiFSI产物的电化学装置以及其他。

摘要： 一种具有纯化罐再生压力监控功能的纯化系统及纯化方法，通过在再生气进气前端的管路上设有再生压力监控装置，包括依次设置第九气动阀、波纹管计量阀、单向阀、压力变送器，第九气动阀的入口分别与第四气动阀、第二气动阀的出口相连，压力变送器的出口分别与第五气动阀、第七气动阀的进口相连。通过波纹管计量阀的调节纯化罐的再生气压力，当主气动阀发生泄漏而造成纯化罐内压力升高，超过调节的设定压力值后，将触发压力变送器的超压报警，从而有效起到再生压力监控功能。

摘要： 本申请提供了一种纳米晶体溶液的纯化装置、纯化方法与纯化系统。该纯化装置包括溶液槽、至少一个过滤器与电极，其中，溶液槽的内壁绝缘，用于盛放互溶溶剂，互溶溶剂与纳米晶体溶液互溶，优选互溶溶剂与纳米晶体溶液中的溶剂相同；各过滤器的至少一部分放置在溶液槽中，用于盛放纳米晶体溶液，放置在溶液槽中的过滤器的至少部分表面为纳米级的过滤膜；电极包括相互隔离设置的正电极与负电极，正电极的第一端与负电极的第一端分别设置在溶液槽中，且具有过滤膜的至少部分过滤器设置在正电极与负电极之间，正电极的第二端用于连接电源的正极，负电极的第二端用于连接电源的负极。纳米晶体溶液通过该纯化装置后，得到了较好的纯化效果。

摘要： 本发明涉及一种纯化设备及使用该纯化设备的纯化方法。本发明可提供一种在蒸馏原料的工序中，可通过在蒸馏塔中最大限度地利用内部热源并减少外部能量的使用来改善整个工序的能量效率的纯化设备及纯化方法。

摘要： 本发明提供纯化铝的方法，和/或经纯化的铝作为溶剂金属来纯化硅的用途。