鸡TLR3胞外区基因克隆、表达及多克隆抗体的制备

摘要

为研究chTLR3在病毒感染过程中的作用,试验采用反转录PCR(RT-PCR)技术从雏鸡法氏囊组织中扩增chTLR3胞外区部分基因片段,大小为1317bp,将其克隆于表达载体pET-30a(+)中,经酶切鉴定后转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,获得大小约为55.8 KDa且以包涵体形式存在重组蛋白,将纯化的重组蛋白免疫新西兰大白兔,获得抗血清。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫印迹(Western-Blot)及体外瞬时转染方法检测,结果表明,试验制备的兔抗chTLR3抗血清效价在2-15以上,并具有良好的免疫反应特性。

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