鸭瘟抗体间接ELISA检测试剂盒的研制及初步应用

摘要

DPV经过鸭胚成纤维细胞增殖、反复冻融、差速离心、蔗糖密度介质离心制备纯化抗原,建立了用于检测鸭血清中抗DPV特异性IgG抗体的间接ELISA方法,并对该法进行了标准化研究,确定了最佳工作条件。在此基础上研制了相应的检测试剂盒并对盒内各组分的保存条件、质量控制以及试剂盒的特异性、重复性等方面进行研究。结果表明:4.751μg/孔的纯化DPV抗原包被反应板可获得良好特异性和敏感性,1:100稀释的待检血清样品反应后OD405值换算为抗体滴度的标准直线方程为:y=1.573+3.552x(r2=0.9528,n=20)。试剂盒在4°C保存3个月或-20°C保存10个月后各项性能都很好。应用该试剂盒对皮下注射、口服和滴鼻免疫DPV弱毒的20日龄樱桃谷鸭血液中抗DPV特异性IgG抗体滴度进行测定,结果表明:皮下免疫鸭于第6d、口服和滴鼻免疫鸭于第9d可在血清中检测到DPV特异性抗体并于第36d达到滴度高峰,且至60d时依然可检测到高滴度抗体。该试剂盒可用于血清流行病学调查和鸭场DP免疫抗体水平的监测。

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