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自然杀伤细胞受体状态与肺癌微环境及肺癌转移相关性研究

摘要

目的:探讨自然杀伤细胞受体状态与肺癌微环境及肺癌转移相关性机制,通过比较肺癌微环境、机体荷瘤状态以及正常状态下,NK细胞的数目、分布、受体表达、功能状态,了解NK细胞与肺癌侵袭转移、预后的关系,从细胞和分子水平了解NK细胞参与的肿瘤微环境在肺癌侵袭转移中的地位。方法:应用兔疫荧光技术比较不同病理类型NSCLC组织中NK细胞浸润数量,检测NK细胞表面受体CD56,CD16表达,并分析其与肺癌患者预后的相关性;应用人高转移大细胞肺癌细胞株L9981和低转移大细胞肺癌细胞株NL9980接种SCID小鼠,建立人高/低转移大细胞肺癌SID鼠移植瘤一肺转移模型;应用流式细胞仪检测各组小鼠肺脏及脾脏中的NK细胞表面受体NKG2D,NKG2A及Ly49I的表达水平及其差异;应用real-time PCR检测不同转移潜能肺癌细胞株小鼠移植瘤中NK细胞表面受体NK1.1,NKG2D,NKG2A和Ly49ImRNA表达水平,并比较其差异。结果:肺癌组织中NK细胞主要集中在肿瘤间质,参与构成肿瘤微环境;成功建立高转移大细胞肺癌细胞株L9981/低转移人大细胞肺癌细胞株NL9980的SCID鼠移植瘤-肺转移模型,体外荧光成像证实荷瘤组移植瘤均接种成功,且均出现肺转移;体外经IL-2激活的NK1.1+CD3-NK细胞对高/低转移人大细胞肺癌细胞的杀伤活性,在不同效靶比之间,差异有显著性;荷瘤鼠移植瘤中,高转移肺癌移植瘤NK细胞表达NKG2D显著高于低转移肺癌组。结论:1.肺癌组织中NK细胞浸润数量与肺癌病理类型及、肺原发肿瘤大小、患者吸烟史及肺癌患者预后有密切关系。2.人肺癌移植瘤及移植瘤转移灶中存在NK细胞激活性受体表达下调和抑制性受体表达上调,可能是导致NK细胞杀伤能力下降的主要原因。3.高转移潜能人大细胞肺癌细胞株L9981抵抗NK细胞杀伤作用较低转移潜能大细胞肺癌细胞株NL9980更强,NK细胞受体变化可作为检测肿瘤细胞侵袭转移能力的一个指标,其机理有待进一步研究。

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