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芜菁花叶病毒(TuMV) HC-Pro蛋白酶结构域的晶体结构

摘要

解析了芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)的HC-Pro蛋白酶结构域的晶体结构。利用大肠杆菌表达了一个包含蛋白酶结构域的片段,并获得了高分辨率的晶体,另外利用硒代晶体和SAD法解析了相位,最终优化的结构分辨率为2.0埃。这个结构是个紧凑的α/β折叠,代表了该酶完成自我切割后的构象。结构显示切割后的碳端尾巴还紧紧结合在活性位点,阻止了其他底物的进入,这种自抑制状态解释了为什么HC-Pro只有分子内切割的活性,而不能切割其他底物。以前发现HC-Pro切割位点附近的指纹序列为:Tyr-X-Val-Gly/Gly(其中X代表非特异性识别的氨基酸),切割发生在两个甘氨酸之间。解释了P1、P2和P4位氨基酸的保守性,这些位置残基的侧链分别包埋在特定大小的口袋中。另外P3位残基的侧链暴露在溶液中,这和该位置序列的不保守性也一致。

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