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人参皂苷Rg1促进人乳腺脂肪来源干细胞体外增殖与成骨分化

摘要

目的:探讨不同浓度人参皂苷Rg1在体外培养条件下对正常人乳腺脂肪来源干细胞(human breast adipose-derived stem cells,HBASCs)增殖和成骨分化的影响. 方法:体外分离培养HBASCs传至第3代后,按2×104/孔接种至96孔板,分别加入含10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L和10-4mol/L人参皂苷Rgl的成骨诱导培养基中进行培养,分别记为B、C、D、E和F组;另设立对照组,仅加入等量标准成骨诱导培养基,另记为A组.采用活细胞计数法(CCK-8)检测Rg1促进HBASCs的增殖作用并绘制细胞生长增殖曲线.通过碱性磷酸酶试剂盒测定细胞碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)活性,放射免疫法检测骨钙素(Osteocalcin,OCN)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的含量,茜素红染色观察矿化钙化结节形成能力. 结果:10-8mol/L Rg1可有效促进HBASCs增殖;随着Rg1浓度的增加,促细胞增殖活性逐渐增强,Rg1浓度为10-6mol/L时细胞增殖活性最强,当Rg1浓度增加至10-4mol/L,则表现为明显的抑制细胞增殖作用.Rg1呈剂量依赖性促进HBASCs的ALP、OCN和OPN的表达.E和F组HBASCs钙化结节形成能力明显优于B、C、D组,对照组HBASCs钙化结节形成相对较少. 结论:HBASCs具有成骨分化的能力,可作为组织工程骨构建及骨缺损修复与再生的种子细胞来源之一.Rg1在一定浓度范围内对体外培养条件下的HBASCs具有促生长增殖作用,但在高浓度时,Rg1对HBASCs的成骨分化具有显著的促进作用,因此可作为一种良好的成骨诱导因子.

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