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首页> 中文会议>第25届广东省科技进步活动月——畜牧兽医学术与科技创新发展大会 >鹅细小病毒NS1蛋白的表达及ELISA方法的建立

鹅细小病毒NS1蛋白的表达及ELISA方法的建立

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为了监测番鸭群中鹅细小病毒(Goose Parvovirus,GPV)的血清学状况,本研究表达了鹅细小病毒NS1蛋白,并建立了检测番鸭血清中鹅细小病毒抗体的间接ELISA方法.通过PCR方法克隆了NS1基因,经亚克隆至pET32a表达载体,该重组质粒经IPTG诱导表达蛋白的相对分子质量约为92kDa.Westernblot分析表明,该重组蛋白能与鹅细小病毒弱毒疫苗免疫的番鸭阳性血清发生特异性反应.随后,通过棋盘法确定了当纯化的NS1蛋白包被量为0.5μg/孔,待检血清1∶50稀释,HRP标记的兔抗鸭二抗1∶10000倍稀释时反应条件最佳.在最佳反应条件下,阴阳性临界值判定标准为0.399.该方法特异性强,与番鸭细小病毒、鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、新城疫病毒和鸭疫里默氏杆菌的阳性血清均无交叉反应;重复性高,批内和批间重复试验的变异系数分别小于5％和10％.用建立的ELISA方法检测养殖场中免疫过鹅细小病毒的番鸭血清样品88份,测得81份为阳性,阳性率为92％.该方法为鹅细小病毒的血清学诊断和流行病学监测奠定了基础.

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