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猪蓝耳病CH-1R株高敏感性Marc145细胞株的克隆与产毒试验

摘要

Marc-145细胞是用于猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)培养的易感细胞.为了进一步提高PRRSV CH-1R弱毒疫苗株在Marc-145细胞中的增殖水平,本试验采用有限稀释法对Marc-145细胞进行克隆.结果表明,克隆后获得的Marc-145/D2细胞株对CH-1R弱毒株具有更高的敏感性.Marc-145母细胞细胞呈典型上皮细胞的形态特征,但细胞个体大小不均一,增殖速度界与A5与D2细胞株之间,通过克隆分离出的A5细胞株单个细胞个体较大,界限清晰,但细胞增殖速度较慢,而D2细胞株活力强,折光性好、增殖速度快,细胞排列整齐,较母细胞与A5更为致密。从细胞计数结果可以看出,D2株单位面积的细胞数与母细胞和A5株相比分别增加15%、35%以上,为病毒的增殖提供了良好的基础。通过对Marc-145 A5、D2克隆细胞株与母细胞三株细胞3次产毒试验收获的病毒液检测,D2株的效价均比母细胞和A5株分别高出100.375TCID50/mL和100.75TCID50/mL以上。试验结果表明D2细胞株比母细胞和A5细胞株更适应PRRSV CH-IR毒株的增殖。通过本次细胞克隆与产毒试验筛选出Marc145-D2克隆细胞株具备作为PRRSV CH-IR株高敏感性细胞株的潜力。

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