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首页> 中文会议>2013年广东省药师周大会 >高效液相色谱法测定人血浆中伊立替康及其活性代谢物SN-38的浓度

高效液相色谱法测定人血浆中伊立替康及其活性代谢物SN-38的浓度

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摘要

目的:伊立替康在临床上使用时,由于个体代谢能力差异的原因,伊立替康及其活性代谢物7-乙基-10-羟基喜树碱(SN-38)在体内的浓度差异很大,常导致患者出现中性粒细胞减少,呕吐和迟发型腹泻等一系列严重的不良反应,因此,有必要建立一个同时测定人血浆中伊立替康(CPT-11)及其活性代谢产物SN-38浓度的高效液相色谱方法.rn 方法:在Agilent 1100高效液相系统的基础上,采用Hypersil C 18色谱柱(250mm×4.6mm,5um)进行分离,以磷酸二氢钾缓冲液(0.1mol·L-1)-乙腈(75∶25,磷酸调pH 3.0)作为流动相,设定荧光检测波长:激发波长355 nm,发射波长515nm,以10-羟基喜树碱作为内标液.取样品490 uL,加内标液10uL,涡旋混合10s之后再加10％高氯酸溶液500uL,涡旋震荡5min,在4℃下12000r·min-1离心2min,将上清液移入装有3.0mL乙酸乙酯的10.0mL的EP管中,涡旋震荡10 min之后再以3500r·min-1离心5 min,小心吸取上层液体到5.0mL的EP管中并真空干燥完全,再用250uL流动相复溶,吸取50uL进样分析.rn 结果:伊立替康、SN-38和10-羟基喜树碱的保留时间分别为5.2 min、6.9 min和9.5 min.以加权最小二乘法计算标准曲线,CPT-11和SN-38的线性回归方程分别为:Y=0.004675+0.002046X(r=0.9996)和Y=0.001334+0.002428X(r=0.9990).CPT-11和SN-38的线性范围分别为10～5000 ng·mL-1和2～500ng·mL-1.两组分的定量下限分别为10 ng·mL-1和2ng·mL-1.CPT-11和SN-38的平均相对回收率分别是97.2％和102.9％,两组分日内、日间精密度均小于10.4％.CPT-11和SN-38在反复冻融、-20℃冷冻条件下保存1个月、蛋白沉淀后室温放置24 h和后制备的稳定性,均符合生物样品分析的要求.rn 结论:本文检测灵敏度好、待测物质保留时间短,且样本处理方法操作简便、经济、易行,检测方法的专属性、精密度、准确度以及稳定性等符合生物样品分析方法的要求,可以应用于CPT-11的药代动力学研究.

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