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白介素4基因多态性与RSV毛细支气管炎易感性的关系

摘要

目的本课题通过研究RSV毛细支气管炎患儿IL-4单核苷酸多态性从而了解在中国上海汉族人群中IL-4单核苷酸多态性与RSV毛细支气管炎病情的关系,探讨遗传机制的差异对疾病发生和预后的影响,为今后个体化用药以及疫苗的制备提供实验资料。方法1.研究对象选自2005年9 月~2007年1月在复旦大学附属儿科医院住院的肺炎儿童。所有患儿年龄<24个月且为汉族。除外先天性心脏病,免疫缺陷,先天性支气管肺发育不良、早产(胎龄<36周),生后进行机械通气者以及使用皮质激素、免疫抑制剂者。分组:RSV毛细支气管炎组168例,男96例,女72例,为RSV阳性;非RSV感染肺炎组215例,男114例,女101例;另选非呼吸道感染的外科住院儿童和儿童保健门诊儿童88例,男47例,女41例作为正常对照组。2.提取外周血基因组DNA,MGB-TaqMan探针法或毛细管电泳法检测各组对象IL-4的-589位点、-33位点同时用ELISA方法测定50例RSV毛细支气管炎、50例非RSV肺炎患儿血清IL-4浓度,并采用呼吸评分法对RSV毛细支气管炎患儿进行RSV毛细支气管炎临床严重度的评估。3.SPSS11.5软件进行卡方检验,检测各位点基因型、等位基因、在各组分布的频率差异;非参数检验和方差分析来检测各组间IL-4水平的差异和RSV毛细支气管炎组中各基因型呼吸评分的差异。结果1.IL-4及IFNγ因多态性位点的基因型在三组对象中的分布符合Hardy-Weinberg平衡;RSV毛细支气管炎组、非RSV肺炎组和正常对照组性别、年龄分布无显著差别(P>O.05)。2.RSV毛细支气管炎组中血清IL-4浓度(pg/ml)(M=0.84,P5=0.12,P95=12.5)显著高于非RSV肺炎组(M=0.29,P5=0.10,P95=6.29),经检验差异有统计学意义(z=2.465,P=0.014)。3.IL-4基因-589位点TT基因型患儿血清IL-4浓度(pg/ml)(M=0.87,P5=0.13,P95=6.94)高于cT基因型(M=0.77,P5=0.11,P95=11.95),经检验差异有统计学意义(z=2.357,P=0.018)。IL-4基因-33位点TT基因型患儿血清IL-4浓度(M=O.84,P5=0.14,P95=7.21)与CT基因型(M=1.57,P5=0.08,P95=12.5)比较无显著性差别(z=0.088,P=O.93)。4.RSV毛细支气管炎组IL-4基因-589位点CC、CT、TT基因型分布频率分别为1.2%、21.4%、77.4%,非RSV肺炎组为1.9%、33%、65.1%,正常对照组为1.1%、36.4%、62.5%。RSV毛细支气管炎组与非RSV肺炎组基因型分布频率比较,差异显著(X2=6.821,P=O.033);RSV毛细支气管炎组与正常对照组比较,差异显著(X2=6.621,P=0.037);非RSV肺炎组与与正常对照组比较,差异无显著差别(X2=0.47,P=O.791)。三组IL-4基因.589位点等位基因频率分别为C 11.9%、18.4%、19.3%;T 88.1%、81.6%、80.7%,RSV毛细支气管炎组与非RSV肺炎组等位基因频率比较差异显著(x2=6.012,P=O.014,ORc=0.6,95%CI:0.398~0.905,ORz=1.666,95%CI:1.105~2.511)。RSV毛细支气管炎组与正常对照组比较,差异显著(x2=5.134,P=O.023);非RSV肺炎组与正常对照组比较,无显著差别(X2=0.074,P=0.786)。5.RSV毛细支气管炎组IL-4基因-33位点CC、CT、TT基因型分布频率分别为1.2%、23.2%、75.6%,非RSV肺炎组为2.3%、34%、63.7%,正常对照组为2.3%、39.8%、58%。RSV毛细支气管炎组与非RSV肺炎组基因型分布频率比较,差异显著(X2=6.313,P=0.043);RSV毛细支气管炎组与正常对照组比较有显著差异(X2=8.495,P=0.014):非RSV肺炎组与正常对照组比较无显著差异(X2=0.929,P=0.629)。IL-4基因-33位点C/T等位基因频率分布:RSV毛细支气管炎组中C为12.8%,T为87.2%,非RSV肺炎组C为19.3%,T为80.7%,二组比较,差异有显著性(X2=5.807,P=O.016),ORc=0.614(95%CI:0.411~0.915);0RT=1.63(95%CI,1.093~2.431)。正常对照组中C为22.2%,T为77.8%,与RSV毛细支气管炎组比较,差异显著(x2=7.525,P=0.006);而非RSV肺炎组与正常对照组相比差异无显著性(X2=0.634,P=0.426)。6.RSV毛细支气管炎患几中IL-4基因.589位点TT基因型呼吸评分为(3.02+0.44)显著高于CT基因型呼吸评分(2.81±O.46),(t=2.56,P=O.01);-33位点TT基因型患儿呼吸评分为(3.02~0.44)显著高于CT基因型呼吸评分(2.79±0.48),(t=2.835,P=0.005)结论1.RSV毛细支气管炎患儿血清IL-4水平高于非RSV肺炎患儿,而IFNy低于非RSV肺炎患儿,提示RSV毛细支气管炎中Th2反应占优势。IL-4基-589位点基因多态性与IL-4表达量有关,TT基因型为高表达基因型;-33位点基因多态性与IL-4水平无关。2.IL-4基因-33位点、-589位点C/T单核苷酸多态性与RSV毛细支气管炎易感性有关,其中TT基因型、T等位基因在RSV毛细支气管炎组占明显优势,可能是RSV毛细支气管炎的易感基因。3.IL-4基因-33位点、-589位点TT基因型呼吸评分高于CT基因型,提示TT基因型易发展为萤症。所以IL-4基因个体差异可能决定着RSV感染后临床病情的不同。

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