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苯代谢产物氢醌对hiPSCs的细胞毒性及胚层发育毒性研究

摘要

目的:体外研究苯代谢产物氢醌对人源性多能干细胞hiPSCs的细胞毒性以及对其随机向外、中、内三个胚层分化发育的影响. 方法:应用不同浓度的苯代谢产物——氢醌作为受试物,以0、1.25μM、2.5μM、5.0μM、10.0μM为暴露剂量,在体外首先进行24h基础细胞毒性,选择细胞活性在90%以上的剂量作为最高染毒剂量;在选定的染毒剂量内,借助hiPSCs在无血清、无动物源性蛋白的基础培养基中可以随机地向外胚层、中胚层和内胚层分化,来研究氢醌暴露对哪个胚层有毒性或毒性比较大. 结果:氢醌24h染毒结束后,5.0μM组活细胞数目下降,细胞活性在89.99±2.59%;10.0μM组细胞镜下形态明显变小,活细胞数目明显下降,细胞活性在32.8±3.31%,有一定的剂量-反应关系,确定后续实验的染毒剂量为0、1.25μM、2.5μM、5.0μM.在随机分化的8天中,外胚层基因MAP2、中胚层基因EOMES和内胚层基因PAX6在细胞内部的表达均逐渐增加,并在第8天达到最高值;而氢醌暴露8天后,这三个基因的表达均随暴露剂量的增加而降低,影响三个胚层的发育. 结论:氢醌暴露对hiPSCs存在一定的细胞毒性,对随机分化过程有一定的胚胎发育毒性.

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