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调控鸡雄性性原细胞分化的关键基因和信号通路的分析

摘要

本研究旨在探寻参与调控鸡雄性性原细胞分化的关键基因和信号通路.采用流式细胞分选法获得纯化的鸡胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)、原始生殖细胞(primordial germ cells,PGCs)和精原干细胞(Spermatogonial Stem cells,SSCs),利用Microarray、RNA-seq对三种细胞中各基因表达量进行检测,运用DAVID、WEGO等数据库深入发掘三种细胞间的转录组差异,筛选关键基因和信号通路,采用qRT-PCR对上述结果进行验证;根据筛选获得关键基因在体外验证各类化学诱导剂的作用.结果表明:①共筛选出GAL9、AMH、PLK1、PSMD7等173个与发育分化及代谢相关的关键基因,筛选出TGF-beta、Notch、Jak-STAT等18条参与细胞增殖、分化、信号传导的信号通路;②qRT-PCR分析验证了Microarray和RNA-Seq表达分析的可靠性和精确性;③通过检测关键基因的表达变化确认了RA与支持细胞、BMP4、性激素在体外能诱导ESCs向着雄性生殖细胞分化.通过对鸡ESCs、PGCs以及SSCs表达谱的生物信息学分析,共筛选获得173个候选关键基因,11条候选关键信号通路,并通过体外诱导实验中关键基因表达变化验证了多种化学物质对ESCs向着雄性生殖细胞方向分化起着促进作用.

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