PEDV-COE基因在转基因玉米中的表达及免疫原性的鉴定

摘要

本实验设计合成猪流行性腹泻病毒(PEDV)主要中和抗原基因(COE基因),将其克隆到植物表达载体pBAC9036中,该表达载体以编码除草剂草甘膦抗性的EPSP基因作为选择标记.用PDS1000/He基因枪转化玉米幼胚,经过愈伤组织诱导、分化再生培养,获得71棵转化再生植株,进一步进行田间草甘膦抗性筛选,最后获得2个T1代转基因玉米株系,PCR分子鉴定,确认外源目的基因已成功整合到玉米基因组.间接ELISA和Western检测结果均为阳性.取表达量较高的一个,提取叶片可溶性蛋白,改下注射免疫小鼠后可产生针对PEDV的特异性抗体.以上结果表明,获得的转基因玉米表达的COE蛋白具有反应原性和免疫原性,为进一步研究PEDV-COE转基因玉米口服疫苗奠定了基础.

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