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家蚕经芸香苷诱导后合适的参照基因表达谱研究

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实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR，qPCR）因灵敏度高，定量准确等特点，已广泛应用于基因表达分析。利用合适的参照基因对qPCR数据进行校正处理是确保该方法分析准确性的关键。本实验首先分别用三种浓度的芸香苷溶液添食家蚕，通过检测家蚕谷胱甘肽-S-转移酶基因d1(BmGSTd1）的诱导转录水平，分析得出浓度为 5×10-2 ng/μL的芸香苷溶液能起到显著的诱导作用;为了选出适用于家蚕诱导实验中qPCR 分析的合适参照基因，测定了BmGSTd1在正常饲养及添食芸香苷（5×10-2 ng/μL）后在中肠和脂肪体中的转录水平，分别用两种内参基因(Actin3 ，GAPDH）和加入外源参照基因(IFP2）对qPCR数据进行标准化，结果发现内源和外源基因标准化的结果差异很大;最后测定三种内参基因的诱导转录水平，结果显示，二者在两种组织中的诱导转录水平均有较大变化。分析比较这些结果表明，管家基因在诱导后的表达不再恒定，而外源基因则不受实验条件的影响，能保证定量结果的准确性。选择加入外源参照基因对qPCR数据进行归一化处理，是家蚕诱导实验中检测基因表达的合适方法。

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