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CTV弱毒株系侵染诱导墨西哥莱檬差异表达基因的筛选及表达动态分析

摘要

柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)为典型的韧皮部限制性病毒,有大量研究表明,病毒诱导的寄主植物症状表现与其基因表达的变化密切相关,不同的病毒既可诱导共同的基因表达,同时也可诱导特定基因的表达。为明确CTV弱毒株系与寄主的互作特点,本研究分别以CTV弱毒株系N4侵染的和健康的墨西哥莱檬为材料,采用抑制性差减杂交技术,构建了2个抑制性差减杂交文库。经反向Northem斑点杂交筛选到202个差异表达基因,其中上调表达的基因有111个,下调表达的基因有91个。参照拟南芥基因功能分类标准并结合本实验实际检索情况,将所筛选到的差异表达基因按其功能共分为8类。采用实时荧光RT-PCR技术对12个随机选取的EST在健康和CTV-N4侵染莱檬植株中的相对表达量进行了分析,结果显示,来自正向文库的EST在CTV-N4侵染的墨西哥莱檬中的相对表达量为健康植株中的2~47倍;来自反向文库的5个基因在健康植株中的表达量为CTV-N4侵染植株的1.2-1.8倍。同时比较分析了CTV强、弱毒株系侵染不同进程中编码几丁质酶、咖啡酸-3-甲基转移酶和脂质转移蛋白的基因表达特点,发现CTV强、弱毒株系侵染莱檬后均能不同程度地诱导这3个基因的表达,在接种后第60d诱导表达量达到高峰,且强毒株系对这3个基因表达的诱导作用更强。本研究结果为进一步分析CTV不同致病力株系与寄主互作特点奠定了一定基础。

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