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金鱼角蛋白基因keratin8全长cDNA、启动子的克隆与启动子活性分析

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角蛋白是构成细胞骨架中间丝的主要家族之一,主要分布于高等真核生物的表皮细胞。本文用RT-PCR和RACE方法扩增出金鱼角蛋白基因全长cDNA,所分离的基因经blast比对鉴定为keratin8.用荧光定量PCR方法检测显示,keratin8基因在所检测的各组织中均有表达。其中皮肤、鳍条和鳃中的表达量最高。根据keratin8 cDNA5’端侧翼序列设计引物,用Genome walker方法分离出此基因的启动子区域1855bp,用TESS在线软件预测出启动子的TATA框及其它转录元件。构建了四个含有不同长度启动子的荧光素酶表达载体，并将其分别和参照质粒pRL-TK共转染于鲤鱼上皮瘤细胞(EPC)中，结果显示含有启动子-1—-864区域的PGL3-KF3表达载体的转录活性最高。为进一步证明此区域在体内的转录活性，构建含有-1—-864启动子区域的绿色荧光蛋白表达载体pgfT2AL220R185-KF3，通过To12转座酶系统把此质粒注射入斑马鱼受精卵，结果显示在皮肤包括眼、心脏、唇、鳃盖中的上表皮均有绿色荧光蛋白的表达，本研究为下一步在转基因鱼上的应用奠定基础。

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来源
《第六次全国动物生物技术学术研讨会》|2011年|1|共1页
会议地点呼和浩特
作者
Zhang Lili; 张莉莉; Ye Xing; 叶星; Jiang Xiaoyan; 江小燕; Gao Fengying; 高风英; Bai Junjie; 白俊杰; Fan Jiajia; 樊佳佳; Tian Yuanyuan; 田园园;
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作者单位

中国农业生物技术学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类观赏鱼类;
关键词
金鱼; 角蛋白; 基因启动子; 表皮细胞; 克隆技术;

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