黄芪甲苷对人骨髓间充质干细胞体外增殖及细胞因子表达的影响

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目的:探讨补气类中药黄芪的单体成分黄芪甲苷对人骨髓间充质干细胞体外增殖及部分细胞因子表达的影响,并初步探明其作用机制。
　　方法:采用 Percoll密度梯度离心法和贴壁筛选法分离、纯化、培养人骨髓间充质干细胞;在倒置相差显微镜下观察原代及传代细胞生长及形态变化;用流式细胞术检测人骨髓间充质干细胞中 CD44、CD71、CD45、CD34的表达;选择对数生长期的第三代人骨髓间充质干细胞,加入不同浓度(0、20、40、80、160、320mg/mL)黄芪甲苷培养72h后,以四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测人骨髓间充质干细胞的增殖指数(OD值),筛选出对人骨髓间充质干细胞增殖有促进作用的最佳浓度,作为后续实验的干预浓度;依据前期实验结果选取浓度为160mg/mL的黄芪甲苷,将对数生长期的第三代人骨髓间充质干细胞分为空白对照组及160mg/mL黄芪甲苷组,培养72h后,通过实时荧光定量 PCR(Real-time PCR)法检测人骨髓间充质干细胞对干细胞因子(SCF)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF) mRNA的表达水平。
　　结果:
　　(1)镜下可见培养细胞贴壁生长,其形态为典型的长梭形,呈网状或漩涡状排列;流式细胞术检测人骨髓间充质干细胞表面抗原,结果显示高表达间充质干细胞表面标志CD44、CD71,而造血干细胞表面标志 CD34、CD45表达阴性。
　　(2)不同浓度(20、40、80、160、320mg/mL)的黄芪甲苷均可促进人骨髓间充质干细胞体外增殖(P<0.05),其中以160mg/mL黄芪甲苷组促增殖作用最明显,当药物达到一定浓度后,人骨髓间充质干细胞增殖不再随药物浓度的增加而增加。
　　(3)黄芪甲苷可促进人骨髓间充质干细胞对 SCF、VEGF、SDF-1 mRNA的表达,而GM-CSF mRNA表达无明显变化。
　　结论:黄芪甲苷可促进人骨髓间充质干细胞体外增殖,其机制可能与黄芪甲苷促进人骨髓间充质干细胞对 SCF、VEGF、SDF-1 mRNA表达有关。

著录项

作者
彭小娟;
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作者单位

甘肃中医学院;

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授予单位甘肃中医学院;
学科中西医结合临床
授予学位硕士
导师姓名白海;
年度 2014
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类中药药理学;
关键词
骨髓间充质干细胞; 黄芪甲苷; 体外增殖; 细胞因子;

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