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引言
第一章文献综述
第二章甘薯胚性悬浮细胞遗传转化体系的建立
2.1材料与方法
2.1.1甘薯胚性细胞悬浮培养系的建立
2.1.2菌株活化和菌液的制备
2.1.3 GUS检测
2.1.4 AS适宜浓度的确定
2.1.5甘薯胚性细胞团Hyg敏感性测定
2.1.6侵染、共培养、选择培养、植株再生和隔离大田评价
2.1.7甘薯总DNA的提取
2.1.8转基因植株的PCR检测
2.1.9转基因植株的dot blot和Southern blot分析
2.2结果与分析
2.2.1栗子香胚性愈伤组织的获得
2.2.2栗子香胚性细胞悬浮培养系的建立
2.2.3 AS适宜浓度的确定
2.2.4栗子香胚性细胞团选择培养阶段Hyg适宜浓度的确定
2.2.5栗子香Hyg抗性愈伤组织的形成和拟转基因植株再生
2.2.6栗子香转基因植株的GUS检测
2.2.7栗子香转基因植株的PCR检测
2.2.8栗子香转基因植株的dot blot分析
2.2.9栗子香转基因植株的Southern blot分析
2.2.10转基因植株的驯化和隔离大田评价
3.1材料与方法
3.1.1菌株、质粒及载体pCAMBIA1301-OCⅠ的构建
3.1.2大肠杆菌质粒DNA和根癌农杆菌mini质粒DNA的提取
3.1.3质粒DNA的酶切、目的片段的回收和连接
3.1.4大肠杆菌和农杆菌感受态的制备和中间载体的导入
3.1.5 PCR检测
3.1.6菌株的保存
3.2结果与分析
3.2.1质粒DNA提取及酶切鉴定
3.2.2植物表达载体pCAMBIA1301-OCⅠ的构建
3.2.3植物表达载体pCAMBIA1301-OCⅠ导入根癌农杆菌EHA105
第四章表达OCⅠ基因转基因甘薯植株的再生及其对甘薯茎线虫病抗性的鉴定
4.1材料与方法
4.1.1胚性细胞悬浮培养系的建立
4.1.2徐薯18胚性悬浮细胞Hyg敏感性测定
4.1.3利用新构建的载体对徐薯18和栗子香的转化
4.1.4转基因植株的GUS检测
4.1.5甘薯基因组DNA的提取
4.1.6转基因植株的PCR检测
4.1.7转基因植株Southern blot分析
4.1.8植株总RNA的提取
4.1.9转基因植株的Nouthern blot分析
4.1.10转基因甘薯植株的茎线虫病抗性鉴定
4.2结果与分析
4.2.1徐薯18和栗子香胚性愈伤组织的诱导和胚性细胞悬浮培养系的建立
4.2.2徐薯18胚性细胞团选择培养阶段Hyg适宜浓度的确定
4.2.3 Hyg抗性愈伤组织的形成和拟转基因植株再生
4.2.4转基因植株的PCR检测
4.2.5转基因植株的Southern blot分析
4.2.6转基因植株的Northern blot分析
4.2.7转基因植株的驯化和大田评价
4.2.8转基因植株的茎线虫抗性接种鉴定
第五章综合讨论与结论
5.1综合讨论
5.1.1外植体种类对甘薯遗传转化效率的影响
5.1.2根癌农杆菌菌株对甘薯遗传转化效率的影响
5.1.3 AS对甘薯遗传转化效率的影响
5.1.4选择剂及选择方法对甘薯遗传转化效率的影响
5.1.5甘薯品种间Hyg适宜浓度的差异
5.1.6不同遗传转化程序对甘薯遗传转化效率的影响
5.1.7 OCⅠ基因对甘薯茎线虫病的抗性
5.1.8 OCⅠ基因对甘薯其他病虫害的抗性
5.2结论
参考文献
致 谢
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