秸秆纤维素高效降解真菌的筛选、鉴定及其纤维素酶基因克隆

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论文说明：英文缩略表

声明

第一章纤维素和纤维素酶的研究进展

1.1秸秆纤维素资源及其性质

1.1.1丰富的秸秆纤维素资源

1.1.2秸秆纤维素的组成

1.1.3秸秆纤维素的性质

1.2降解纤维素的微生物

1.2.1真菌类型

1.2.2细菌类型

1.2.3放线菌类型

1.3纤维素酶的研究进展

1.3.1纤维素降解酶系

1.3.2纤维素酶的结构分类

1.3.3纤维素酶的作用机理

1.3.3纤维素酶基因的克隆及表达

1.4纤维素酶蛋白质组学研究进展

1.4.1蛋白质组学研究的历史背景

1.4.2微生物蛋白质组学研究的内容和方法

1.4.3纤维素酶领域的蛋白质组学研究进展

1.5秸秆纤维素的应用

1.5.1秸秆还田

1.5.2饲用化

1.5.3制备复合材料

1.5.4生物炼制

1.6研究的目的和意义

1.7研究内容、方法和技术路线

1.7.1本论文研究的内容和方法

1.7.2本论文研究的技术路线

第二章秸秆纤维素降解菌的筛选

2.1实验材料

2.1.1样品来源

2.1.2碳源及培养基

2.1.3主要试剂

2.1.4主要仪器

2.2实验方法

2.2.1筛选方法

2.2.2表型特征鉴定

2.2.3 18S rDNA鉴定

2.2.4 18S rDNA-5.8Sr DNA-28Sr DNA ITS序列鉴定

2.2.5 18S rDNA系统发育树的构建

2.2.5 ITS序列系统发育树的构建

2.3结果与分析

2.3.1秸秆纤维素降解菌的筛选

2.3.2分离菌株的生长特性

2.3.3分离菌株的形态观察

2.3.3分离菌株的18S rDNA序列分析

2.3.4基于18S rDNA的系统发育树的构建

2.3.5基于ITS序列的系统发育树的构建

2.4讨论

第三章秸秆纤维素降解菌液体培养产酶及其影响因素的研究

3.1实验材料

3.1.1实验菌株和培养基

3.1.2药品、试剂

3.1.3溶液和缓冲液

3.1.4主要仪器

3.2实验方法

3.2.1纤维素粗酶液的制备

3.2.2纤维素酶活力的测定

3.2.3葡萄糖标准曲线的绘制

3.2.4不同时间(day)对降解菌株酶活力的影响

3.2.5 pH对降解菌株酶活力的影响

3.2.6温度对降解菌株酶活力的影响

3.2.7氮源对降解菌株酶活力的影响

3.2.8碳源对降解菌株酶活力的影响

3.3结果分析

3.2.1培养时间(day)对降解菌株酶活力的影响

3.2.2 pH值对降解菌株酶活性的影响

3.2.3温度对降解菌株作用效果的影响

3.2.4氮源对降解菌株作用效果的影响

3.2.5碳源对降解菌株作用效果的影响

3.4讨论

第四章纤维素降解菌cDNA文库的构建和纤维素酶基因的克隆

4.1实验材料

4.1.1菌株与λ噬菌体

4.1.2培养基和抗生素

4.1.3溶液、缓冲液和试剂

4.1.4 RNA提取准备工作

4.2实验方法

4.2.1总RNA提取

4.2.2 cDNA文库的构建

4.2.3目的克隆子的筛选

4.3结果与分析

4.3.1降解菌株总RNA提取和cDNA文库构建部分酶切片段的制备

4.3.2降解菌株cDNA文库的库容量

4.3.3携带纤维素酶基因的克隆子的筛选

4.4讨论

第五章纤维素分解菌株的蛋白质组学研究

5.1实验材料

5.1.1实验菌株与培养基

5.1.2药品、试剂

5.1.3溶液及配置

5.1.4实验仪器

5.2实验方法

5.2.1蛋白质的提取

5.2.2 Bradford法对蛋白质的定量

5.2.3蛋白质的双向凝胶电泳

5.2.4蛋白质凝胶扫描和图像分析

5.3结果与分析

5.3.1样品中蛋白质的含量

5.3.2各菌株蛋白质表达图谱分析

5.3.3各菌株蛋白质差异表达

5.4讨论

第六章全文结论

6.1结论

6.2下一步拟开展的工作

参考文献

致 谢

作者简历