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枳和资阳香橙铁转运基因IRT1及其启动子的克隆和功能比较研究

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第1章 前言

1.1研究背景及意义

1.2植物缺Fe研究进展

1.3果树缺Fe研究进展

1.3.1柑橘缺Fe研究进展

1.3.2其它果树缺Fe研究进展

1.4 IRT1研究进展

1.4.1 IRT1功能

1.4.2 IRT1调控途径

1.5 启动子与转录因子互作研究

1.5.1启动子研究

1.5.2转录因子研究

1.5.3酵母单杂交

1.6研究的目的和内容

1.6.1研究的目的

1.6.2研究的内容

1.6.3研究的预期目标

第2章 材料和方法

2.1实验材料

2.1.1植物材料

2.1.2 菌株和载体

2.1.3工具酶及主要试剂

2.1.4 主要培养基及溶液配方

2.1.5主要仪器设备

2.2实验方法

2.2.1基因的克隆与鉴定

2.2.2植物总RNA提取

2.2.3 DNA片段回收与纯化

2.2.4重组质粒的构建与转化

2.2.5基因的序列分析

2.2.6枳和资阳香橙基因组DNA提取

2.2.7启动子序列克隆

2.2.8 qRT-PCR表达分析

2.2.9 PtIRT1和CjIRT1启动子片段转化拟南芥

2.2.10 种子的播种与抗生素的筛选

2.2.11 转基因植株的PCR鉴定

2.2.12 拟南芥纯合株系筛选

2.2.13 GUS活性分析

2.2.14 酵母单杂交的载体构建

2.2.15 诱饵酵母菌株构建

2.2.16 诱饵酵母AbA抗性的背景表达水平检测

2.2.17 PtIRT1和CjIRT1基因启动子与FIT互作的验证

第3章 结果分析

3.1 PtIRT1和CjIRT1基因的克隆与序列比较分析

3.2转录因子PtFIT和CjFIT克隆与序列比较分析

3.3枳和资阳香橙中IRT1和FIT的表达模式分析

3.4枳和资阳香橙IRT1启动子的克隆与序列比较分析

3.5启动子缺失片段转拟南芥株系的鉴定和纯和子筛选

3.6 启动子GUS活性分析

3.7酵母单杂载体的PCR验证

3.8诱饵酵母菌株的AbA最佳使用浓度

3.9枳和资阳香橙中转录因子FIT与IRT1启动子互作的 Y1H 验证

第4章 讨论与结论

4.1枳和资阳香橙中IRT1基因的比较分析

4.2枳和资阳香橙中转录因子FIT的比较分析

4.3枳和资阳香橙IRT1启动子的比较分析

4.4 PtIRT1和CjIRT1基因启动子与FIT的互作

4.5结论

参考文献

致谢

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