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摘要
第一章 文献综述
1.1 植物自交不亲和性的简介
1.2 孢子体自交不亲和性的分子研究
1.2.1 与S位点连锁的相关基因
1.2.2 与S位点非连锁的相关基因
1.3 孢子体自交不亲和的信号传导网络
1.4 酵母双杂交系统简介
第二章 引言
2.1 研究的目的与意义
2.2 研究内容
2.2.1 甘蓝自交不亲和关联因子的筛选与克隆
2.2.2 甘蓝自交不亲和关联因子的基因表达分析
2.2.3 甘蓝自交不亲和关联因子的酵母载体构建和相互作用研究
2.2.4 甘蓝Exocyst复合体亚基的克隆及酵母载体的构建
2.2.5 甘蓝Exocyst复合体亚基与自交不亲和关联因子的相互作用研究
第三章 材料与方法
3.1 实验材料
3.1.1 植物材料
3.1.2 菌株
3.1.3 试剂
3.1.4 主要培养基和溶液
3.1.5 主要仪器
3.2 实验方法
3.2.1 甘蓝总DNA的提取
3.2.2 甘蓝各组织总RNA的提取
3.2.3 cDNA第一链的合成
3.2.4 引物设计
3.2.5 PCR扩增目的片段
3.2.6 PCR产物回收
3.2.7 胶回收产物连接T载体并转化大肠杆菌
3.2.8 阳性克隆的鉴定与测序
3.2.9 生物信息学分析
3.2.10 各基因RT-PCR组织表达特异性分析
3.2.11 各基因时空表达特异性分析
3.2.12 MLPKs基因的分离与分析
3.2.13 酵母载体的构建
3.2.14 Exocyst复合体亚基的克隆
3.2.15 Exocyst复合体亚基酵母载体构建
3.2.16 AH109酵母感受态的制备
3.2.17 重组质粒转化酵母感受态
3.2.18 重组质粒的毒性检测
3.2.19 重组质粒的自激活检测
3.2.20 蛋白质相互作用的检测
第四章 结果与分析
4.1 基因克隆、生物信息学分析及表达分析
4.1.1 BosiPA1
4.1.2 BPS1
4.1.3 KPDP
4.1.4 MLP423
4.1.5 Tubulin
4.1.6 Annexin
4.1.7 Actin
4.1.8 ARC1
4.1.9 Exo70A1
4.2 MLPKs基因的克隆与分析
4.2.1 MLPKs各转录本的获得
4.2.2 MLPKf1、MLPKf2、MLPKm、MLPKi基因的cDNA序列和氨基酸序列分析
4.2.3 MLPKf1、MLPKf2、MLPKi基因的gDNA序列和基因结构分析
4.2.4 MLPKf1、MLPKf2、MLPKm、MLPKi基因的表达分析
4.2.5 芸薹属中包含MLPK基因的染色体区域和拟南芥中包含APK1b基因的染色体区域的同线性分析
4.3 甘蓝自交不亲和关联因子间的相互作用研究
4.3.1 酵母载体的构建
4.3.2 酵母载体毒性检测
4.3.3 重组质粒的自激活检测
4.3.4 相互作用的检测
4.4 甘蓝Exocyst复合体亚基与自交不亲和关联因子的相互作用研究
4.4.1 Exocyst复合体亚基的克隆
4.4.2 酵母载体的构建
4.4.3 酵母载体毒性检测
4.4.4 重组质粒的自激活检测
4.4.5 相互作用的检测
第五章 讨论
第六章 结论与展望
6.1 结论
6.1.1 甘蓝自交不亲和关联因子的获得
6.1.2 甘蓝自交不亲和关联因子的基因表达分析
6.1.3 甘蓝自交不亲和关联因子酵母载体的构建及相互作用研究
6.1.4 Exocyst复合体亚基的克隆及与自交不亲和关联因子的互作研究
6.2 展望
参考文献
致谢
附录