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婴儿双歧杆菌介导HSV-TK/GCV自杀基因治疗系统治疗裸鼠肾癌的实验研究

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摘要

前言

1 实验材料

1．1 菌株及细胞

1．2 主要试剂及来源

1．3 主要试剂配制

1．4 实验动物

1．5 主要仪器

2 实验方法

2．1 肾癌786-O细胞复苏、培养及收集

2．2 裸鼠肾癌模型建立及鉴定

2．3 婴儿双歧杆菌及其基因工程菌复苏、培养及收集

2．4 各组裸鼠质量及荷瘤质量测定

2．5 TUNEL染色法检测裸鼠肾癌组织细胞凋亡

2．6 免疫组化染色法检测p-Stat3、Bcl-xL及Bax蛋白表达情况

2．7 Real-time PCR检测Stat3、Bcl-xL及Bax mRNA表达水平

2．8 Western Blot检测p-Stat3、Bcl-xL及Bax蛋白表达水平

2．9 统计学分析

3 结果

3．1 裸鼠肾癌建模情况

3．2 各组裸鼠质量及荷瘤质量比较

3．3 各组裸鼠肾癌组织凋亡细胞分布及AI值比较

3．4 各组裸鼠肾癌p-Stat3、Bcl-xL及Bax蛋白的表达情况

3．5 各组裸鼠肾癌Stat3和Bcl-xL及Bax mRNA表达水平

3．6 各组裸鼠肾癌p-Stat3、Bcl-xL及Bax蛋白表达水平

4 讨论

全文总结

参考文献

文献综述 肿瘤微环境与双歧杆菌肿瘤靶向治疗

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文

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摘要

目的:
　　评价婴儿双歧杆菌介导单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)/丙氧鸟苷(GCV)自杀基因治疗系统对裸鼠肾癌的疗效，初步探讨其诱导肾癌组织细胞凋亡及对肾癌组织p-Stat3、Bcl-xL及Bax表达的影响。
　　方法:
　　1.采用肾癌786-O细胞悬液皮下注射法建立裸鼠肾癌模型，将模型裸鼠随机分为4组，分别经尾静脉注射生理盐水（生理盐水组）、婴儿双歧杆菌（婴儿双歧杆菌组）、携带空质粒pGEX-5X-1的婴儿双歧杆菌（空质粒组）、携带重组质粒pGEX-TK的婴儿双歧杆菌（重组质粒组），再联合腹腔注射GCV。
　　2.治疗4周结束后，称取各组裸鼠质量及荷瘤质量。
　　3.TUNEL染色法检测各组肾癌组织细胞凋亡情况。
　　4.免疫组化染色法检测各组肾癌组织p-Stat3、Bcl-xL及Bax蛋白表达情况。
　　5.实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测各组肾癌组织Stat3、Bcl-xL及Bax mRNA表达水平。
　　6.蛋白质印记法（Western blot）检测各组肾癌组织p-Stat3、Bcl-xL及Bax蛋白表达水平。
　　结果:
　　1.治疗后，重组质粒组较空质粒组、婴儿双歧杆菌组和生理盐水组裸鼠质量增加(P＜0.05)，荷瘤质量降低(P＜0.05)。
　　2.TUNEL染色结果显示重组质粒组凋亡指数明显高于空质粒组、婴儿双歧杆菌组和生理盐水组(P＜0.01)。
　　3.免疫组化染色结果显示重组质粒组肾癌组织p-Stat3、Bcl-xL蛋白表达明显低于空质粒组、婴儿双歧杆菌组和生理盐水组(P＜0.01)。而重组质粒组肾癌组织Bax蛋白表达则明显高于空质粒组、婴儿双歧杆菌组和生理盐水组(P＜0.01)。
　　4.重组质粒组肾癌组织Stat3、Bcl-xL mRNA及p-Stat3、Bcl-xL蛋白表达水平较空质粒组、婴儿双歧杆菌组和生理盐水组明显下调(P＜0.01)。而重组质粒组肾癌组织Bax mRNA及蛋白表达水平则较空质粒组、婴儿双歧杆菌组和生理盐水组明显上调(P＜0.01)。
　　结论:
　　婴儿双歧杆菌介导HSV-TK/GCV自杀基因治疗系统明显抑制裸鼠肾癌生长，可能通过抑制Stat3活化进而阻断Stat3信号转导通路，下调其下游抗凋亡蛋白Bcl-xL表达的同时上调促凋亡蛋白Bax的表达来诱导裸鼠肾癌组织细胞凋亡，发挥抑瘤作用。

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