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霉酚酸酯对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的保护作用及分子机制研究

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摘要

前言

1 材料

1．1 实验动物

1．2 主要实验试剂

1．3 主要配置溶液

1．4 主要仪器及设备

2 方法

2．1 建立C57BL／6小鼠肺纤维化模型及分组

2．2 给药方法

2．3 取材

2．4 肺组织病理学观察

2．5 RT-PCR检测小鼠肺组织TGF-β1、COL1A1、COL1A2mRNA表达

2．6 免疫组化及Western blot检测TGF-β1蛋白表达

2．7 统计学分析

3 结果

3．1 肺组织病理变化

3．2 RT-PCR检测各组小鼠肺组织TGF-β1、COL1A1、COL1A2mRNA表达

3．3 免疫组化检测小鼠肺组织TGF-β1蛋白表达情况

3．4 Western blot检测小鼠肺组织TGF-β1蛋白表达情况

4 讨论

全文总结

参考文献

文献综述 肺纤维化机制的研究进展

致谢

攻读硕士期间发表的文章

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摘要

目的：初步探讨霉酚酸酯(Mycophenolate mofetil，MMF)在博莱霉素(bleomycin，BLM)诱导的小鼠肺纤维化模型中的保护作用及分子机制。
　　方法：将36只C57BL/6小鼠随机分为6组，每组6只，分别为正常对照组、MMF对照组、BLM模型组、MMF干预组（分为低、中、高剂量组）;于实验第1天将BLM模型组、MMF干预组经气管注入BLM（6mg/kg溶于50μl生理盐水）;从实验第2天开始对MMF干预组分别给予低、中、高剂量的MMF(20，60，100 mg/kg)，MMF对照组给予100 mg/kg;于实验第16天处死所有小鼠，收集小鼠肺脏标本;HE，Masson染色从组织形态学上观察肺组织纤维化病变情况，Aschcroft法进行肺纤维化评分;RT-PCR检测各组肺组织中转化生长因子-β1（transforming growth factorβ1，TGF-β1）、COL1A1及COL1A2的基因表达水平;利用免疫组化法、Western blot检测各组肺组织中TGF-β1的蛋白表达情况。
　　结果：BLM诱导的小鼠肺纤维化模型构建成功，MMF高剂量干预组与BLM模型组比较，前者的纤维化程度减轻，在mRNA水平降低了COL1A1及COL1A2的表达(P＜0.01)，TGF-β1在转录及蛋白水平明显降低(P＜0.05)。而低剂量组和中剂量组与BLM模型组间、MMF对照组与正常对照组间差异无统计学意义（P＞0.05）。
　　结论：MMF能有效减轻BLM诱导的小鼠肺纤维化病变，并在转录水平抑制Ⅰ型胶原的基因表达，其机制可能与下调促纤维化细胞因子TGF-β1相关。

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