P38MAPK通路对BMP-13诱导C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化的影响

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第一部分、P38MAPK信号通路在BMP-13诱导C3H10T1/2细胞成心肌样细胞分化过程中的作用
　　目的:研究P38MAPK信号通路在BMP-13诱导C3H10T1/2细胞成心肌样细胞分化过程中的作用。
　　方法:通过293细胞的扩增得到高滴度Ad-BMP-13、Ad-GFP。分别向C3H10T1/2细胞转染Ad-BMP-13和Ad-GFP24h后，倒置荧光显微镜下观察绿色荧光的表达，流式细胞术检测转染效率。实验分组如下:①Ad-BMP-13转染组②Ad-GFP转染组③C3H10空白组。通过Ad-BMP-13转染C3H10T1/2细胞24h，Western Blot检测p-P38MAPK和t-P38MAPK的表达;免疫荧光技术定位p-P38 MAPK。
　　结果:
　　1.通过293细胞的扩增后得到高滴度Ad-BMP-13、Ad-GFP。
　　2.Ad-BMP-13、Ad-GFP转染C3H10T1/2细胞24h后流式细胞术检测转染效率分别为41％和45.12％。
　　3.BMP-13诱导组的p-p38MAPK表达量较空载腺病毒GFP组和C3H10空白组明显升高(P＜0.05)。各组间t-p38MAPK的表达无显著差异。
　　4..Ad-BMP-13诱导组p-P38MAPK表达于细胞浆和细胞核中，但主要见于细胞核。
　　结论:
　　1.得到高滴度Ad-BMP-13、Ad-GFP，转染C3H10T1/2细胞后可使其高表达BMP-13。
　　2.Ad-BMP-13诱导C3H10T1/2细胞分化过程中能够激活P38MAPK通路。
　　第二部分、Ad-si-p38和sb203580阻断P38MAPK对BMP-13诱导C3H10T1/2细胞心肌样分化过程中的影响
　　目的:研究Ad-si-p38和sb203580阻断P38MAPK对BMP-13诱导C3H10T1/2细胞心肌样分化过程中的影响。
　　方法:
　　1.通过293细胞的扩增得到高滴度Ad-si-P38、Ad-si-NC。分别转染Ad-si-P38和Ad-si-NC24h后倒置荧光显微镜下观察红色荧光的表达。实验分组如下:①si-P38组:Ad-si-P38转染C3H10T1/2细胞24h组;②si-NC组: Ad-si-NC转染C3H10T1/2细胞24h组;③C3H10组:不经任何处理的C3H10T1/2细胞。Western blot检测t-P38 MAPK的表达水平。
　　2.Ad-si-p38阻断p38MAPK后对BMP-13诱导分化的影响:si-p38+Ad-BMP-13转染组、si-NC+Ad-BMP-13转染组、si-NC+Ad-GFP转染组和C3H10空白组。Western blot检测cTnT和Cx43的表达，荧光定量PCR检测GATA-4和MEF-2C的mRNA表达3.SB203580阻断p38MAPK后对BMP-13诱导分化的影响:DMSO+Ad-BMP-13转染组、SB203580(2、5和10μmol/l)+Ad-BMP-13转染组。荧光定量PCR检测GATA-4和MEF-2C的mRNA表达。
　　结果:
　　1.Ad-si-P38、Ad-si-NC转染C3H10T1/2细胞24h后，倒置荧光显微镜下观察转染效率达50％左右，Western blot检测高表达Ad-si-P38组t-P38 MAPK的表达较Ad-si-NC组和C3H10组显著降低(P＜0.05)。
　　2.si-NC+BMP-13组cTnT、Cx43的蛋白表达水平显著高于si-NC组和空白(P＜0.05);si-p38+BMP-13组cTnT、Cx43的蛋白表达显著低于si-NC/BMP-13组(P＜0.05)。si-NC+BMP-13组GATA-4、MEF-2C水平显著高于Ad-si-NC组和空白组(P＜0.05);si-p38+BMP-13组的GATA-4、MEF-2C水平显著低于si-NC+BMP-13组(P＜0.05)。
　　3.利用不同浓度（2、5和10μmol/1）的SB203580分别处理细胞后，SB203580预处理的BMP-13诱导组GATA-4、MEF-2C的表达与BMP13+DMSO组比较有明显降低(P＜0.05);随SB203580浓度的增加，GATA-4、MEF-2C的表达也逐渐降低。
　　结论:
　　1.病毒扩增得到高滴度Ad-si-P38、Ad-si-NC，转染C3H10T1/2细胞后可使其低表达P38 MAPK。
　　2.P38MAPK通路的激活促进C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化。

著录项

作者
孙文静;
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作者单位

重庆医科大学;

展开▼
授予单位重庆医科大学;
学科儿科学
授予学位硕士
导师姓名陈沅;
年度 2013
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类小儿心脏、血管疾病;
关键词
P38MAPK通路; 心肌样细胞; 细胞分化; SB203580; si-p38; 免疫荧光;

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