幽门螺杆菌重组HpaA蛋白的表达及其包涵体纯化方法的探讨

代理获取

页面导航

目录
摘要
著录项
相似文献
相关主题

摘要

研究目的：用基因工程技术克隆和表达幽门螺杆菌(Helicobacterpylori，H.pylori)的hpaA基因，以期获得重组蛋白HpaA，并鉴定其抗原性和免疫原性，为进一步制备预防H.pylori感染的HpaA制剂提供了材料。采用镍柱层析和切胶纯化两种方法提取可溶性rHpaA，并比较其效果，为hpaA表达中的包涵体纯化提供一条经济便捷的方法。方法：用PCR方法从H.pylori DNA中扩增hpaA基因片段。插入原核表达载体pQE30，转化受体菌DH5 α，经克隆及序列分析正确后在大肠杆菌中进行表达。SDS-PAGE分析表达蛋白的分子量和表达形式，经镍柱层析纯化后Western blot证实其抗原性；免疫小鼠后ELISA检测血清特异性抗体鉴定其免疫原性。将SDS-PAGE电泳后的表达蛋白用4M的乙酸钠显色指示切胶，所切胶块在透析袋中经电场作用，提取可溶性目的蛋白，Western blot鉴定其抗原性；同时以间接ELISA法比较分别以切胶纯化法和镍柱层析法所得表达蛋白与抗体结合的滴度。结果：重组表达质粒pQE30-hpaA构建成功，插入的基因片段全长782bp，与基因文库中的hpaA基因同源性达97.0％。SDS-PAGE显示表达产物相对分子量为30kD，表达量占全菌总量的32.3％，主要以包涵体形式表达，具有良好的抗原性和免疫原性，镍柱层析纯化后纯度达97％。重组蛋白包涵体经切胶纯化后可得到纯度93.9％的可溶性重组HpaA，Western blot鉴定切胶纯化法提取的可溶性rHpaA也具有良好的抗原性，经ELISA法比较，其抗体结合滴度与镍柱层析法提取的rHpaA相近。结论：H.pylori hpaA基因片段克隆表达成功，获得高纯度可溶性的重组HpaA蛋白，具有良好的抗原性和免疫原性，为进一步制备预防H.pylori感染的HpaA制剂提供了材料。并证实了切胶纯化包涵体蛋白的方法切实可行，与传统方法比较，简单经济实用，为大量制备可溶性HpaA提供了新的方法。

著录项

作者
栗俊杰;
展开▼
作者单位

重庆医科大学;

展开▼
授予单位重庆医科大学;
学科病原生物学
授予学位硕士
导师姓名杨致邦;
年度 2008
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类其他;
关键词
幽门螺杆菌; 重组蛋白HpaA; 原核表达载体pQE30; 包涵体; 切胶纯化法;

相似文献

中文文献
外文文献
专利

1. 幽门螺杆菌hpaA基因克隆及其蛋白的表达纯化 [J] . 张冰 ,王洪艳 ,李环 . 北华大学学报（自然科学版） . 2020,第001期
2. 幽门螺杆菌hpaA基因工程菌蛋白表达条件优化、纯化及其活性鉴定 [J] . 黄学勇 ,段广才 ,范清堂 . 广西医科大学学报 . 2007,第002期
3. 从包涵体中纯化重组人幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位 [J] . 王缚鲲 ,邹全明 ,张卫军 . 第三军医大学学报 . 2002,第11期
4. 幽门螺杆菌HpaA重组蛋白的表达及免疫效果检测 [J] . 栗俊杰 ,杨致邦 ,张任飞 . 中国生物制品学杂志 . 2008,第6期
5. 乳糖诱导对幽门螺杆菌UreB、HpaA和大肠杆菌LTKA63、LTB重组蛋白表达的影响 [J] . 钊守凤 ,严杰 ,胡爱萍 . 浙江大学学报（医学版） . 2004,第006期
6. 幽门螺杆菌内置佐剂UreB和HpaA双价重组疫苗对实验感染小鼠的免疫保护作用 [C] . 严杰 ,徐飏 ,毛亚飞 . 首届长三角科技论坛：长三角生物医药发展论坛 . 2004
7. 幽门螺杆菌CagA和VacA重组蛋白的表达、纯化及抗原性检测 [A] . 马小丽 . 2011

幽门螺杆菌重组HpaA蛋白的表达及其包涵体纯化方法的探讨

目录

摘要

著录项

相似文献

相关主题

期刊订阅