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经腹股沟管输精管结扎对兔睾丸、附睾和输精管的组织学影响

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摘要

前言

1、材料与方法

2、实验方案

3结果

4.讨论

5.小结

结论

参考文献

文献综述:输精管结扎即将退出历史舞台吗？

致谢

攻读学位期间撰写和发表的论文

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摘要

研究背景与目的： 输精管结扎是一种安全、可靠的男性节育方法，已在全世界开展30多年，实施了约1亿例<'[1]>，在我国己实施近5千万例<'[2]>，但自上世纪90年代以来，我国男性绝育术开展呈明显下降趋势<'[3]>。有两个主要因素影响其开展，一是并发症，二是绝育的不可逆性。输精管结扎的并发症主要是阴囊血肿、附睾郁积、痛性精子肉芽肿等。不过，随着显微外科技术以及试管婴儿技术的发展，人们越来越关心输精管结扎对睾丸内精子发生的影响，精子的数量和精液的质量直接关系到输精管吻合术后生育能力的恢复和人工授精的成功率。 在既往研究中，我们采用经阴囊进行兔输精管结扎的手术方式，无论开放性还是闭合性输精管结扎均引起了较大程度的精子发生损害<'[4,5]>。我们推测，输精管结扎术后对精子发生的影响，可能与输精管结扎的部位--结扎处离输精管附睾端的距离以及结扎术局部的手术创伤有关。因此，本研究采用一种离输精管附睾端较远因此对睾丸局部影响小的输精管结扎术--经腹股沟管输精管结扎术，通过与以前的经阴囊输精管结扎术进行对比，探讨这种手术方式是否可以减轻手术局部的创伤和术后早期(10天、3月)对精子发生等的影响。 方法： 1、实验方案： 实验1：正常雄性日本大耳白兔30只，4月龄，随机分为3组：①对照组--不作任何处理。②经腹股沟管单侧闭合性输精管结扎组(笪-单-闭)--经腹正中线切口，打开两侧腹股沟管，挑出输精管，左侧或右侧(交替确定)输精管结扎--切除一段输精管并结扎两侧断端；对侧作假手术(除没剪断并结扎输精管外，其余步骤均同结扎侧)。③经阴囊单侧闭合性输精管结扎组(囊-单-闭)--经阴囊切口暴露睾丸、附睾、输精管，左侧或右侧(交替确定)输精管结扎--切除一段输精管并结扎两侧断端，近附睾端结扎处距离附睾尾约1cm；对侧作假手术。术后10天取材：对照组的动物选一侧(左侧或右侧，交替确定)取材，其余组的动物均取两侧的睾丸、附睾和输精管。 实验2：6月龄正常雄性日本大耳白兔32只，随机分为2组：①经腹股沟管单侧闭合性输精管结扎组(管-单-闭)--左侧或右侧(交替确定)结扎，对侧假手术；②经腹股沟管单侧近端开放性输精管结扎组(管-单-开)--左侧或右侧(交替确定)结扎，对侧假手术。笪-单-开组的结扎术同管-单-闭组，但近附睾端输精管断端保持开放，另一断端的输精管才结扎。术后10天从各组随机抽选5只动物取材，其余的动物术后3月取材；取材包括双侧的睾丸、附睾和输精管。 2．组织处理 取下的睾丸、附睾和输精管用Bouin液浸润固定约48小时，然后从睾丸、附睾和输精管各随机切取1～3个组织块，用羟乙基甲基丙烯酸树脂包埋，切25μm厚的树脂切片，睾丸用PAS和苏木精染色，附睾、输精管用苏木精染色。 3．观察与测量 术后取材时肉眼观察睾丸、附睾的形态及其与周围组织的粘连情况；光镜下观察睾丸、附睾和输精管的组织学结构；用体视学方法测量睾丸内生精小管的直径和体积，附睾内的附睾管和精子团等的体积，输精管内精子团等的体积分数(比例)。 4．统计检验 同组动物结扎侧与(对侧)假手术侧的形态定量指标的比较，采用配对f检验，以P≤0.05表示有显著性差异。 结果： 1．解剖观察： 术后10天，管-单-闭或管-单-开组的睾丸、附睾形态正常，与周围组织无粘连，近附睾端输精管结扎处或近附睾端输精管断口处距附睾尾约5～8cm。囊-单-闭组的睾丸、附睾与周围组织粘连，且部分器官变形。 术后3月，管-单-闭组或管-单-开组结扎侧的附睾尾和输精管高度肿胀，肿胀的输精管呈乳白色，约占附睾尾至结扎处或开放处的输精管长度的3/5。 2．睾丸组织学： 精子发生损害的主要特征是：生精小管萎缩，直径变小，生精上皮变薄，生精细胞脱落、数量减少且出现退化细胞和多核细胞。 术后10天，管单一闭组结扎侧和假手术侧各有1/7个睾丸的精子发生受到严重损害，两侧的睾丸体积或生精小管平均直径无显著性差异。囊-单-闭组结扎侧和假手术侧各有3/8个睾丸的精子发生受到严重损害，另2/8个睾丸的精子发生受到轻度损害，两侧的睾丸体积或生精小管平均直径无显著性差异。管-单-开组结扎侧(所有4个睾丸)和假手术侧(所有5个睾丸)精子发生均未受到严重损害，两侧的睾丸体积或生精小管平均直径无显著性差异。 术后3月，管-单-闭组或管-单-开组结扎侧和假手术侧睾丸的精子发生均未受到严重损害，两侧的睾丸体积或生精小管平均直径无显著性差异。 3．附睾组织学： 结扎对附睾的影响主要表现在：结扎侧附睾管的扩张和精子在附睾管内郁积。 术后10天，管-单-闭组结扎侧附睾内精子团的总体积、尾部附睾管或尾部精子团的体积与假手术侧相比有增加趋势，增加43％-62％，但差异无显著性。囊-单-闭组结扎侧尾部附睾管或尾部附睾管腔的体积与假手术侧相比均有显著性增加，增加38％-73％；附睾总体积或附睾内精子团的总体积与假手术侧相比有增加趋势，增加13％-95％，但差异无显著性。管-单-开组结扎侧附睾尾的体积或尾部附睾管的体积与假手术侧相比似有减小趋势(减少21％-24％)，而精子团的总体积或尾部精子团的体积似有增加趋势(增加14％-17％)，但差异均无显著性。 术后3月，管-单-闭组和管-单-开组的结扎侧均出现附睾管的高度扩张和精子郁积。结扎侧附睾或附睾尾的体积、附睾内精子团的总体积以及附睾尾内附睾管、附睾管管腔、精子团的体积均显著增加到假手术侧1.64～3.87倍(管-单-闭组)或1.43～2.61倍(管-单-开组)。 4、输精管组织学： 输精管结扎对输精管的影响主要表现在结扎侧输精管的扩张和精子郁积。 术后10天，管-单-闭组或管-单-开组结扎侧输精管的管径，输精管内上皮层及管腔的体积分数或输精管内精子团的体积分数，与假手术侧相比均无显著性差异。 术后3月，管-单-闭组或管-单-开组均有结扎近端输精管的高度扩张和精子郁积。结扎侧的输精管内上皮层及管腔的体积分数和精子团的体积分数分别显著增加到假手术侧的2.52、4.28倍(管-单-闭组)或2.06、3.60倍(管-单-开组)。 结论： 1．该研究显示，①经腹股沟管的输精管结扎，不引起睾丸、附睾、输精管与周围组织的粘连。②经腹股沟管的开放性(共4个睾丸)及闭合性(6/7个睾丸)输精管结扎术后10天，睾丸的精子发生未见明显损害。本文研究和我们既往的研究显示，经阴囊的近附睾端输精管结扎术后10天均引起睾丸与周围组织的粘连，闭合性(见于4/12<'[5]>、3/8个睾丸)及开放性(所有12个睾丸<'[5]>)结扎术后10天引起了严重的精子发生损害。这有力的说明，输精管结扎术后早期对精子发生的损害与手术创伤或睾丸周围的炎症刺激有关。 2．该研究显示，经腹股沟管的闭合性及开放性输精管结扎术后3月，附睾尾、输精管肿胀，附睾管及输精管内精子郁积，但睾丸内的精子发生未见明显损害。我们既往的研究<'[5,6]>显示，经阴囊的近附睾端输精管闭合性结扎术后3月，约有一半的睾丸有严重的精子发生损害。经阴囊的近附睾端闭合性输精管结扎后，睾丸产生的精子不能贮存于扩张性好的兔输精管，附睾内贮存的精子也很有限<'[5,6]>；而经腹股沟管的远离附睾的闭合性或开放性输精管结扎术后，睾丸产生的精子可继续输送出来，贮存在较长的输精管内，因而可缓解睾丸内压。这说明，输精管结扎对精子发生的损害与睾丸产生的精子不能排出有关。睾丸产生的精子不能排出，就势必导致睾丸内压升高，进而影响精子发生。该研究为输精管结扎致精子发生的损害主要是由于睾丸内压所致的假说<'[4,7]>提供了有力的证据。

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