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Mn-SOD在乳酸乳球菌中的表达及双歧杆菌染色体整合质粒载体的构建

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前言

第一部分sodA基因的克隆

第二部分sodA基因电转化乳酸乳球菌及表达

第三部分双歧杆菌整合质粒载体的构建

全文总结

参考文献

文献综述分子生物学技术在双歧杆菌研究应用中的进展

致谢

攻读学位期间发表的文章及参加的学术会议

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摘要

目的：构建含锰超氧化物歧化酶基因的原核高效表达质粒pBV220-sod并在乳酸乳球菌(MGl363)中表达，同时构建双歧杆菌整合质粒载体，为下一步SOD发酵奶的研制奠定基础。方法： 1)根据GenBank中报道的大肠杆菌MGl655全基因组DNA序列中SOD的编码基因序列设计引物，PCR扩增大肠杆菌锰超氧化物歧化酶基因，并将其克隆入原核高效表达质粒载体pBV220中构建重组质粒pBV220-sod。 2)优化乳酸乳球菌MGl363的电转化条件，并在此条件下将重组质粒pBV220-sod电转入MGl363中。用黄嘌呤氧化酶法对SOD的表达活性进行测定，同时用SDS-PAGE观察SOD的表达量。 3)以双歧杆菌基因组DNA为模板，根据16SrRNA序列设计引物进行PCR扩增，并将其克隆入质粒pBV220-sod中构建出整合质粒载体pBV220-sod-bif。结果： 1．成功地构建了重组质粒pBV220-sod，经酶切和PCR鉴定后与预期结果吻合。核酸序列测定显示插入的soda基因与GenBank报道的序列完全一致。 2．优化了乳酸乳球菌MGl363的电转化条件，确定了最佳参数：电压10kV／cm，电阻20012，电容25gF，时间4．5～5．Oms，利用电转化成功地将重组质粒pBV220-sod导入MGl363中。用黄嘌呤氧化酶法测得SOD的表达活性约683．7NU／mgprot。SDS-PAGE显示SOD的表达量有明显增加。 3．成功地构建了双歧杆菌整合质粒载体pBV220-sod-bfi，经酶切和PCR鉴定后与预期结果吻合。结论： soda基因在乳酸乳球菌中获得了成功表达，同时构建了双歧杆菌染色体整合质粒载体，有利于双歧杆菌基因工程菌的开发，为SOD发酵奶的研制奠定了基础。

著录项

作者
刘方久;
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作者单位

重庆医科大学;

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授予单位重庆医科大学;
学科临床检验诊断学
授予学位硕士
导师姓名张德纯;
年度 2006
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类基因的表达;
关键词
超氧化物歧化酶; 乳酸乳球菌; 双歧杆菌;

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