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【6h】

Ran在对虾血细胞吞噬中的调节作用及酚氧化酶调控相关miRNA的筛选

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吞噬作用在无脊椎动物的先天性免疫过程中起着非常重要的作用，RanGTPase可以通过与myosin轻链蛋白的相互作用调控对虾血细胞对WSSV病毒的吞噬过程，并防御WSSV的感染，但是关于Ran基因的表达调节还未被报道过。本论文克隆包含TATA盒的Ran GTPase的启动子，利用生物素-链霉亲和素试验发现Ran启动子可与Ran蛋白相互结合，在Drosophila S2细胞中，利用萤光素酶报告基因分析发现Ran GTPase与Ran启动子结合后，萤光素酶活性降低，表明启动子的转录活性降低，导致Ran基因转录水平下调。本研究揭示Ran蛋白可结合自身启动子调节自身的基因转录，这种反馈调节机制是一种新的Ran基因转录调节机制。
　　 由于Ran蛋白在对虾免疫吞噬中的重要作用，因此本研究以Ran蛋白为靶蛋白，筛选免疫增强剂。采用体外测定Ran GTP酶活的方法，筛选获得2个能有效增强Ran酶活的分子，分别为白介素4和溶血卵磷脂；将白介素4和溶血卵磷脂注射对虾后测定吞噬活性，结果表明这2种分子均可显著提高对虾血细胞吞噬活性；血细胞吞噬活性提高使得WSSV拷贝数显著降低，进而显著降低对虾因感染病毒导致的死亡率。本研究为对虾病害的防治提供新的免疫增强剂，也为对虾病害的防治提供新的技术手段。
　　 miRNA是一类长度约为20-25nt的非编码单链小分子RNA，能够对基因进行转录后表达调控，进而参与生长发育、细胞分化、凋亡和增殖等多种生理过程。为获得与酚氧化酶原系统(ProPO)相关的miRNA，本研究分别采用酚氧化酶(PO)激活剂TPCK和抑制剂allythourea处理对虾，再进行miRNA测序。测序结果及差异序列比较发现，19条miRNA在激活剂或抑制剂处理后，表现为上调或下调表达；采用Northern blot验证了试验结果。因此，19条差异miRNA对PO的表达可能具有调控作用，参与ProPO免疫途径。

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