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长江流域南方鲇和鲇16S rRNA基因扩增片段的RFLP及测序的研究

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目录

第一部分文献综述

一、16S rRNA基因的研究及其应用

二、PCR与RFLP技术相结合在物种分子生物学研究中的应用

第二部分长江流域不同野生地理种群和养殖品种的南方鲇和鲇16SrRNA基因扩增片段的RFLP及测序的研究

1、前言

2、材料和方法

2.1主要仪器

2.2主要生化和分子生物学试剂

2.3实验用溶液

2.4实验用鲇鱼

2.5基因组DNA的制备

2.616S rRNA基因片段的扩增和酶切

2.7 16S rRNA基因扩增片段RFLP的数据处理

2.8 16S rRNA基因扩增片段的测序

3、实验结果

3.1 DNA纯度的检测

3.2 16S rRNA基因扩增片段的限制性内切酶水解电泳结果

3.3测序结果

4、数据统计结果

4.1限制性内切酶的水解结果

4.2常见组合单倍型的物理图谱

4.3各组合单倍型的限制性位点数和识别位点的核苷酸数

4.4组合单倍型间共同拥有的限制性位点数和位点差异数

4.5遗传多样性

4.6遗传相似度、遗传距离和分化年代

4.7聚类关系

4.8对测序结果的统计

5、结果分析与讨论

5.1关于16S rRNA基因扩增的模板DNA

5.2关于16S rRNA基因扩增片段的RFLP分析

5.3关于16S rRNA基因扩增片段RFLP的数据处理

5.4关于16S rRNA基因扩增片段测序结果的分析

5.5 RFLP分析法与测序法的比较

5.6南方鲇和鲇线粒体DNA 16S rRNA基因进化的保守性

6、结论

第三部分:参考文献

致谢

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摘要

论文分为两个主要部分:第一部分:对16S rRNA基因的研究现状及其应用进行文献综述,并对PCR技术和RFLP分析结合起来的研究方法在物种系统发育和种群遗传研究方面的潜力作了一定的论述.第二部分:长江流域南方鲇和鲇16S rRNA基因扩增片段的RFLP及测序的研究.用一对合成的引物,通过PCR扩增出南方鲇和鲇线粒体DNA 16S rRNA基因的一个约0.61kb的片段,用10种限制性内切酶水解该扩增片段,只有HaeⅢ在种内和种间产生了限制性片段长度多态性.通过对16S rRNA基因扩增片段直接测序,发现该基因扩增片段核苷酸多态性很丰富.该研究结果表明:以16S rRNA基因的扩增片段用RFLP法建立南方鲇和鲇种间的分子遗传标记的意义不大,而用测序法可作物种进化和系统发育分析的研究.

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