Hsp90α维持VP16的稳定性及VP16介导的HSV-1α基因的转录

声明

中英文缩略语对照表

第一章 前言

1.1 单纯疱疹病毒（Herpes simplex virus）

1.1.1 HSV概况

1.1.2 HSV-1的生命周期及VP16在其中扮演的角色

1.1.3 HSV-1的治疗现状及抗HSV-1药物开发策略

1.2 热休克蛋白90（Heat shock protein 90， Hsp90）

1.2.1 Hsp90及Hsp90抑制剂

1.2.2 Hsp90从多个水平调控基因表达

1.2.3 Hsp90在病毒感染中具有重要作用

1.3 研究本课题的目的及意义

1.4 技术路线

第二章 实验材料与实验方法

2.1 实验材料

2.1.1 细胞系、菌种与病毒株

2.1.2 实验仪器及设备

2.1.3 实验耗材

2.1.4 主要试剂和主要商品化试剂盒

2.1.5 抗体与工具药

2.1.6 基因克隆相关引物信息

2.1.7 荧光定量PCR相关引物信息

2.1.8 siRNA相关信息

2.1.9 实验动物相关信息

2.1.10 主要溶液的配制方法

2.2 实验方法

2.2.1 细胞的复苏

2.2.2 细胞的传代及铺板

2.2.3 细胞的冻存

2.2.4 HSV-1的培养

2.2.5 HSV-1的TCID50测定

2.2.6 病毒空斑减数实验

2.2.7 质粒的构建

2.2.8 质粒的提取

2.2.9 质粒的转染(以六孔板为例)

2.2.10 siRNA的转染(以六孔板为例)

2.2.11 细胞总蛋白提取

2.2.12 蛋白浓度的测定

2.2.13 皮肤组织样品总蛋白的提取

2.2.14 SDS-PAGE胶的配制

2.2.15 Western-blot分析

2.2.16 免疫荧光实验

2.2.17 免疫共沉淀

2.2.18 细胞样品总RNA的提取

2.2.19 皮肤组织样品总RNA的提取

2.2.20 反转录

2.2.21 荧光定量PCR扩增

2.2.22 双荧光素酶报告基因检测实验

2.2.23 HSV-1感染小鼠皮肤带状疱疹模型

2.2.24数据的统计学处理

第三章 实验结果

3.1 Hsp90α参与调控HSV-1的α基因的启动子活性

3.2 Hsp90α参与维持α基因转录核心蛋白VP16的稳定性

3.3 VP16通过其保守结构域与Hsp90α相互作用

3.4 Hsp90抑制剂引起的VP16的降解经自噬途径完成

3.5 Hsp90抑制剂引起的VP16的降解依赖VP16的保守结构域

3.6 Hsp90抑制剂可以改善小鼠皮肤感染HSV-1引起的带状疱疹

第四章 结论

4.1总结与讨论

4.2创新

4.3展望

参考文献

硕士期间科研成果

致谢