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人脐血间充质干细胞培养方法的比较

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第一章 前 言

第二章 材料与方法

2.1 实验标本

2.2 主要仪器

2.3 主要试剂

2.4 脐血的采集

2.5 Ficoll密度梯度离心法分离脐血单核细胞

2.6 贴壁培养法分离纯化脐血间充质干细胞

2.7 脐血间充质干细胞的形态学观察

2.8 脐血间充质干细胞的表面标志检测

2.9 数据处理

第三章 结果

3.1 不同培养方法对脐血间充质干细胞的影响

3.2 脐血间充质干细胞的表面抗原特性

第四章 讨论

4.1 脐血间充质干细胞分离和培养方法的选择

4.2 脐血间充质干细胞作为软骨组织工程种子细胞的潜能

第五章 结论

参考文献

附录

综述脐血间充质干细胞的研究进展

致谢

个人简历

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摘要

目的:两种体外培养、扩增、纯化人脐血间充质干细胞方法的比较。
  方法:无菌条件下采取40例足月顺产的脐带血,肝素抗凝。应用Ficoll密度梯度离心法分离脐血单核细胞。将利用Ficoll密度梯度离心法分离得到的细胞随机分为两组,分别用两种培养基进行培养。A组20例用MesenGro人间充质干细胞培养基进行培养;B组20例用DMEM培养基进行培养。对比两组梭形的间充质干细胞出现时间、细胞集落出现时间、培养时间、P0代细胞数量。选用生长情况良好细胞,用流式细胞仪检测间充质干细胞表面特异性标记表达情况。
  结果:A组梭形的间充质干细胞平均出现时间为6.75±0.97d,细胞集落平均出现时间为9.9±1.12d,P0代细胞平均培养时间为19.95±1.40d,P0代细胞平均数量为(8.15±0.35)×105;B组梭形的间充质干细胞平均出现时间为10.45±1.50d,细胞集落平均出现时间为14.95±1.57d,P0代细胞平均培养时间为28.60±1.90d,P0代细胞平均数量为(6.34±0.63)×105。A组优于B组(P<0.01)。流式细胞仪检测显示,培养的细胞强表达间充质干细胞表面标志CD73和CD105,阳性率99.1%,不表达造血干细胞表面标志CD45和CD34,阴性率99.3%。
  结论:在培养间充质干细胞的数量、形态、生长速度和培养时间诸方面,MesenGro人间充质干细胞培养基均优于DMEM培养基。选用MesenGro人间充质干细胞培养基可以更纯、更快、更好地从脐血中培养出表达间充质干细胞表面标志的细胞。

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