伊氏锥虫（Trypanosoma evansi）感染对小鼠肝脏和脾脏基因表达谱的影响及重组伊氏锥虫beta-微管蛋白的免疫原性研究

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第一章绪论

第一节伊氏锥虫概述

1 伊氏锥虫的形态和生活史

2 流行病学

3 致病作用

4 临床症状

5 病理变化

6诊断

7 治疗和预防

第二节动物肝脏和脾脏的生理功能及伊氏锥虫感染对动物肝脏和脾脏影响的研究进展

1 动物肝脏和脾脏的生理功能

2 伊氏锥虫感染对动物肝脏和脾脏影响的研究进展

第三节基因芯片技术及其在寄生虫学研究中的应用

1 基因芯片的基本原理

2 基因芯片的分类

3 基因芯片技术的基本步骤

4 基因芯片技术在寄生虫学研究中的应用

第四节非洲锥虫疫苗研究进展

1 非洲锥虫表面抗原变异

2 非洲锥虫疫苗研究进展

第五节本论文研究的内容及意义

第二章材料和方法

第一节材料

1 实验动物及虫株

2 质粒和菌种

3 主要试剂

4 溶液和培养基

5 实时定量PCR所使用的引物见表2-3：

6 主要实验仪器

第二节方法

1 锥虫冻存及复苏

2 伊氏锥虫感染小鼠和基因芯片材料的准备

3 肝脏和脾脏总RNA的提取（联合基因公司方法）

4 探针标记与杂交

5 数据分析

6 定量PCR验证基因芯片结果

7 Hsp70和Pcna的免疫组织化学

8 TUNEL法检测肝细胞凋亡

9 伊氏锥虫beta-微管基因的克隆

10 伊氏锥虫beta-微管蛋白基因的原核表达

11 SDS-PAGE的检测

12 Western印迹

13 免疫保护实验

14 兔免疫血清的制备

15 ELISA检测动物体内抗体反应水平

16 体外抑制锥虫生长实验

第三章结果与分析

第一节伊氏锥虫感染对小鼠肝脏和脾脏基因表达谱的影响

1 芯片杂交结果

2 感染伊氏锥虫后小鼠肝脏和脾脏重要基因表达的变化

3 实时定量PCR验证cDNA微列阵结果

4 Hsp70和Pcna的免疫组织化学

5 TUNEL结果

第二节重组伊氏锥虫beta-微管蛋白免疫原性研究

1 伊氏锥虫beta-微管蛋白基因的克隆

2 表达载体的构建

3 伊氏锥虫beta-微管蛋白的表达、纯化和复性

4 小鼠免疫保护实验

5 免疫的小鼠和兔子体内抗体反应情况

6 体外锥虫生长抑制实验

第四章讨论

1 感染伊氏锥虫后小鼠肝脏和脾脏基因表达的变化与致病的关系

2 重组伊氏锥虫beta-微管蛋白诱导宿主对非洲锥虫亚属不同种之间广泛的免疫保护作用

3 重组伊氏锥虫beta-微管蛋白诱导小鼠保护作用的可能机理

4 自体免疫反应及脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）污染等相关问题

总结与展望

参考文献

附录Ⅰ在读期间已发表和待发表的文章

附录Ⅱ缩略词

致谢

论文原创性声明