十字花科黑腐病菌中一类与趋化性相关的感受蛋白基因的研究

声明

摘要

第一章 前言

1．1 十字花科黑腐病菌的概述

1．1．1 十字花科黑腐病菌

1．1．2 黄单胞菌属的特征

1．2 Xcc致病的生化因子

1．2．1 胞外多糖

1．2．2 胞外酶

1．2．3 脂多糖

1．2．4 Ⅲ型效应物

1．3 细菌趋化性的概述

1．3．1 细菌趋化性

1．3．2 细菌的运动行为

1．3．3 细菌趋化性的信号转导机制

1．3．4 细菌趋化性的调节机制

1．4 本研究的主要目的和意义

第二章 材料与方法

2．1 本实验所用材料

2．1．1 菌株和质粒

2．1．2 本实验所用引物

2．1．3 本实验所用培养基

2．1．4 本实验试剂的配制

2．1．5 抗生素的使用

2．2 本实验的实验技术

2．2．1 细菌的培养及保存

2．2．2 细菌基因组DNA提取

2．2．3 质粒DNA提取

2．2．4 化学转化(CaCl2法)感受细胞的制备

2．2．5 化学转化

2．2．6 三亲接合

2．2．7 琼脂糖凝胶电泳

2．2．8 DNA的纯化

2．2．9 限制性内切酶酶切

2．2．10 DNA的连接

2．2．11 常规PCR

2．2．12 致病性试验

2．2．13 过敏性反应试验

2．2．14 胞外多糖的定性检测

2．2．15 胞外酶的检测

2．2．16 运动能力的检测

2．2．17 抗逆性检测

2．2．18 生物膜形成检测

2．2．19 突变体营养缺陷型检测

2．2．20 缺失突变体的构建

2．2．21 缺失突变体的验证

2．2．22 构建突变体互补菌株

第三章 结果与分析

3．1 蛋白质的生物信息学分析

3．1．1 基因功能分析

3．1．2 基因的结构域功能简介

3．1．3 推测蛋白的基本特征

3．2 缺失突变体的构建

3．2．1 基因旁侧同源序列的PCR扩增

3．2．2 将旁侧同源序列连接到pK18mobsacB载体上

3．3 缺失突变体的筛选和验证

3．4 缺失突变体的功能互补

3．5 缺失突变体的生长曲线的测定

3．5．1 缺失突变体在NYGB中的生长曲线

3．5．2 缺失突变体在MMX中的生长曲线

3．5．3 缺失突变体在NYGA平板上的生长情况

3．5．4 缺失突变体在MMX平板上的生长情况

3．6 缺失突变体胞外酶的检测

3．6．1 胞外蛋白酶的检测

3．6．2 胞外淀粉酶的检测

3．6．3 胞外纤维素酶的检测

3．7 缺失突变体胞外多糖的检测

3．8 缺失突变体运动能力的检测

3．9 缺失突变体抗逆性检测

3．10 缺失突变体生物膜检测

3．11 缺失突变体的致病性实验

3．12 过敏性反应试验

3．13 细菌趋化性的检测

第四章 结果与讨论

4．1 结论

4．2 讨论

参考文献

致谢

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