三七总皂苷对顺铂诱导HK-2细胞氧化应激损伤及线粒体自噬的影响

代理获取

页面导航

目录
摘要
著录项
相似文献
相关主题

摘要

目的：研究三七总皂苷(Panax nonstaining saponins，PNS)对顺铂(CDDP)诱导的人肾近曲小管上皮细胞(Human proximal tubular epithelial cells，HK-2)氧化应激损伤以及线粒体自噬的作用及其机制，为改善顺铂在临床治疗时引起的肾损害提供依据。
　　方法：(1)确定顺铂的造模浓度：取对数生长期的HK-2细胞培养24h后，分别加入一浓度梯度的顺铂(1.56，3.12，6.25，12.5，25ug/mL)干预24小时后用CKK-8法检测细胞活力，结合镜下损伤细胞形态特征、以低于IC50的浓度为造模浓度。
　　(2)PNS的毒性试验及工作浓度确定：取对数生长期的HK-2细胞培养24h后，分别加入一浓度梯度的的PNS(0.39，0.78，1.56，3.12，6.25，12.5g/L)干预24小时后用CCK-8法检测细胞活力。
　　(3)PNS对顺铂诱导HK-2细胞损伤模型的影响：取对数生长期的HK-2细胞培养24h后，给予顺铂（造模浓度）和PNS（工作浓度）分别干预1，3，6，12，24小时后用CKK-8法检测细胞活力，观察PNS对损伤的HK-2细胞的缓解作用，检测细胞氧化应激指标ROS、MDA含量及SOD活性，利用荧光显微镜观察膜电位(MMP)变化。
　　(4)PNS对顺铂诱导HK-2线粒体自噬水平的影响：在透射电镜(TEM)下观察药物干预6h后的HK-2细胞的线粒体形态，通过RT-qPCR检测关键因子低氧诱导因子(HIF-1α)的mRNA表达，利用免疫细胞化学法测定关键因子HIF-1α的蛋白水平，同时利用蛋白免疫印迹法测定自噬相关蛋白LC3、BNIP3、Beclin1的水平。
　　结果：1、顺铂的造模浓度为6.25ug/mL，PNS的工作浓度为6.25g/L。
　　2、PNS对顺铂诱导HK-2细胞损伤模型的影响：HK-2细胞暴露于顺铂3，6，12，24小时后，与正常组比较，CDDP组的细胞活性水平显著降低(P＜0.05)，随着顺铂干预时间的延长，HK-2细胞损伤程度逐渐加重，SOD活性和MMP降低，ROS及MDA水平升高;与CDDP组比较，CDDP+PNS组的细胞活性水平明显升高（P＜0.05），HK-2细胞的线粒体损害明显改善，SOD酶活性和MMP升高，MDA、ROS水平降低。
　　3、PNS对顺铂诱导HK-2细胞线粒体自噬水平的影响：HK-2细胞暴露于顺铂后，与正常组比较，电镜可观察到CDDP组的HK-2细胞的线粒体损伤明显，HK-2细胞LC3、HIF-1α、BNIP3和Beclin1蛋白表达增加（P＜0.05）。与CDDP组对比时，CDDP+PNS组细胞电镜下可观察到自噬体，上述的自噬相关的蛋白表达显著升高（P＜0.05）。
　　结论：1、顺铂能诱导HK-2细胞氧化应激及线粒体损伤。PNS对顺铂诱导的HK-2细胞氧化应激损伤有缓解保护作用，同时说明HK-2细胞氧化应激损伤模型成功。
　　2、PNS可能通过增强HK-2细胞的保护性自噬而降低顺铂诱导的细胞氧化应激损害，其机制可能与HIF-1α介导的HK-2细胞线粒体自噬的信号转导通路HIF-1α/BNIP3/Beclin1相关。

著录项

作者
周金玲;
展开▼
作者单位

广西医科大学;

展开▼
授予单位广西医科大学;
学科药理学
授予学位硕士
导师姓名杨玉芳;
年度 2017
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类中药实验药理;
关键词
三七总皂苷; 药理机制; 肾近曲小管上皮细胞; 氧化应激损伤; 线粒体自噬; 顺铂;

相似文献

中文文献
外文文献
专利

1. 三七总皂苷对TGF-β1诱导的HK-2细胞表型转分化的影响 [J] . 张毅 ,陈孝文 ,刘海燕 . 中国中西医结合肾病杂志 . 2005,第006期
2. EGCG对高糖诱导的HK-2细胞氧化应激损伤的保护作用 [J] . 代春美 ,宋雨泽 ,杨伟 . 天然产物研究与开发 . 2016,第005期
3. 姜黄素抑制顺铂诱导人肾小管上皮细胞系HK-2凋亡 [J] . 吕文秀 ,吴文韬 ,郑士梅 . 基础医学与临床 . 2018,第002期
4. 三七总皂苷通过线粒体途径抑制顺铂诱导的大鼠肾细胞凋亡 [J] . 刘新文 ,黄振光 ,杨玉芳 . 中国药理学通报 . 2015,第002期
5. 三七总皂苷对顺铂诱导肾损伤大鼠模型自噬蛋白LC3和Beclin1的影响 [J] . 刘新文 ,邹小琴 ,黄振光 . 南京中医药大学学报 . 2015,第001期
6. 促红细胞生成素对窒息新生儿血清诱导HK-2细胞凋亡作用的影响 [C] . 邓刚 ,董文斌 ,李清平 . 中国医师协会第一次全国新生儿科学术会议 . 2011
7. 茶多糖对高糖诱导的HK-2细胞氧化应激损伤的保护作用及TGF-β1、α-SMA表达影响的研究 [A] . 郑铁骑 . 2017

三七总皂苷对顺铂诱导HK-2细胞氧化应激损伤及线粒体自噬的影响

目录

摘要

著录项

相似文献

相关主题

期刊订阅