PC-B2抗AFB1对L-02肝细胞氧化损伤及CYP1A2、3A4酶活力及其基因表达的影响

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目的：本研究通过对PC-B2抗AFB1对L-02肝细胞氧化损伤和I相代谢酶CYP1A2、3A4活力及基因表达影响的研究，探讨PC-B2干预AFB1致肝细胞损伤的效果及机理，初步明确PC-B2对肝细胞的保护作用，为今后进一步开展保肝防癌的治疗和预防提供科研基础。
　　方法：采用体外细胞实验，以含PC-B2或/和AFB1的培养液对生长状态良好且处于对数期的人胚肝细胞（L-02细胞）体外培养。实验分空白对照、溶剂对照、AFB1染毒、PC-B2处理和PC-B2干预共五组。用30μg/ml为AFB1实验染毒浓度；3、10、30μg/ml为PC-B2实验处理和干预浓度。倒置荧光显微镜观察并拍照记录细胞生长状态，噻唑蓝法检测细胞增殖活力的变化，吸光度法测定脂质过氧化产物MDA含量及抗氧化酶系中SOD、GSH-PX活性，荧光酶标法测定细胞的CYP1A2、CYP3A4酶活力，荧光定量PCR法测定CYP1A2、CYP3A4基因表达水平。数据资料录入SPSS16.0统计分析软件进行分析。
　　结果：与溶剂对照组相比，以30μg/ml AFB1染毒后，L-02细胞胞膜结构不清，漂浮细胞增多，细胞活力（％）（69.9±2.46）明显受到抑制（P＜0.05）；以PC-B2施加干预，在30μg/ml PC-B2干预剂量下，L-02细胞活性较AFB1染毒组显著升高（P＜0.05）。
　　AFB1染毒后，诱导L-02细胞MDA生成量较溶剂对照组增多明显（P＜0.05），用不同浓度PC-B2干预处理后，MDA生成量较AFB1染毒组明显减少（P＜0.05）。
　　AFB1染毒组L-02细胞SOD和GSH-PX活力（U/mgprot）分别为35.96±0.83和211.16±9.98，较溶剂对照组40.01±0.54，287.10±6.96均明显降低（P＜0.05）；与AFB1染毒组相比，用30μg/ml PC-B2干预可显著抑制AFB1所致L-02细胞SOD和GSH-PX活力的降低（P＜0.05），数值分别为42.2±1.32，263.04±13.94。
　　相对空白对照组，PC-B2单独处理组L-02细胞CYP1A2、CYP3A4酶活力均略有降低，其中以30μg/ml PC-B2处理剂量降低明显（P＜0.05）；AFB1染毒组L-02细胞CYP1A2、CYP3A4酶活力较溶剂对照组明显升高（P＜0.05）；而PC-B2干预组CYP1A2、CYP3A4酶活力较AFB1染毒组降低（P＜0.05），且高剂量PC-B2干预对酶活性的影响更明显（P＜0.05）。
　　与溶剂对照组比较，30μg/ml AFB1作用24h后，L-02细胞CY P1A2、CYP3A4基因表达升高，分别为溶剂对照组的9.42、8.38倍（P＜0.05）。PC-B2干预组细胞CYP1A2、CYP3A4基因表达较AFB1染毒组明显降低，且随PC-B2干预浓度增大作用越明显（P＜0.05）。PC-B2处理组基因表达水平有所升高，但差别无统计学意义。
　　结论：1.在体外细胞实验中，30μg/ml AFB1能明显抑制L-02细胞生长，而3~30μg/ml PC-B2能够促进L-02细胞生长，且能够减轻AFB1染毒所致的细胞生长抑制。2. PC-B2能减轻AFB1致L-02细胞抗氧化系统的损伤，一方面抑制AFB1诱导的MDA生成，另一方面升高SOD、GSH-PX酶的活力。3. AFB1染毒后，L-02细胞CYP1A2、CYP3A4酶活力及其基因表达升高，PC-B2干预可抑制这两种酶活力及基因表达，提示PC-B2可能通过干预AFB1在体内的代谢发挥作用。4. PC-B2诱导抗氧化酶活性及抑制I相代谢酶活性而发挥抗AFB1致L-02细胞损伤的作用，有可能成为黄曲霉毒素高污染区肝癌预防和治疗的选择。

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作者
范秋玉;
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作者单位

广西医科大学;

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授予单位广西医科大学;
学科营养与食品卫生学
授予学位硕士
导师姓名鲁力;
年度 2016
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类肝及胆疾病;
关键词
原花青素B2; 黄曲霉毒素B1; 肝细胞; 氧化损伤; 细胞色素P450; 基因表达;

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