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下司犬线粒体DNA及主要组织相容性复合物的遗传多样性研究

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1 文献综述

1.1 保护遗传学简介

1.2 犬科动物保护遗传学研究现状

1.3 线粒体 DNA 控制区与保护遗传学

1.4 主要组织相容性复合体(MHC)与保护遗传学

1.5 研究目的和意义

2 材料和方法

2.1 实验材料

2.2 主要实验仪器

2.3 核酸提取

2.4 DNA 序列的克隆

2.5 DLA-DRB1 外显子 2 的 SSCP 分型

2.6 重组质粒鉴定

2.7 DNA 序列分析

3 结果

3.1 家犬 mtDNA 遗传多样性分析

3.2 家犬 DLA-DRB1 外显子 2 遗传多样性分析

4 讨论

4.1 下司犬线粒体 D-loop 序列的结构特征

4.2 下司犬分化地位及管理单元的确定

4.3 下司犬的线粒体 DNA 遗传多样性

4.4 SSCP 技术重复性及 DRB1 外显子 2 分型结果

4.5 DRB1 外显子 2 碱基组成和密码子的使用频率

4.6 下司犬 DLA-DRB1 多样性

5 主要结论和创新点

参考文献

缩略语表

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项目资助

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摘要

采用PCR(Polymerase Chain Reaction,聚合酶链式反应)扩增和测序方法获得下司犬线粒体DNA的D-loop序列,发现其D-loop5’端高变区Ⅰ582bp碱基序列的A+T含量明显高于G+C含量,表现出强烈的反G偏倚。并于下司犬高变区Ⅰ序列共检测到11个多态位点,构成7种单倍型,单倍型多样性为0.867,说明下司犬线粒体D-loop的单倍型类型丰富,但其高变区Ⅰ的核苷酸多样性(Pi=0.00519)和平均核苷酸差异(k=3.002)却提示,下司犬的遗传多样性较低。聚类分析结果显示,中国家犬有3个母系来源,下司犬与藏獒的亲缘关系最近,建议将藏獒用于下司犬的选育和复壮。
  家犬的主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)又称为犬白细胞抗原(Dog leukocyte antigen,DLA)。本研究利用PCR-SSCP(Single stranded conformation polymorphism,单链构象多态性)技术检测了下司犬等4个品种,46只家犬个体的主要组织相容性复合体DRB1基因第二外显子(DLA-DRB1exon2)的序列变异。目的DNA经SSCP分型后克隆测序,获得270bp的目的基因片段。与已知等位基因比较发现,本文所测序列共有62个多态位点,定义了53个等位基因,其中48个为新发现等位基因。所有序列中都没有发现序列的插入或缺失,经等位基因序列比对发现,非同义替换导致39个氨基酸改变。家犬主要组织相容性复合体DRB1基因第二外显子的非同义替换与同义替换比值(dN/dS)为2.676,说明该基因受正选择作用。数据分析显示,下司犬种群DLA-DRB1exon2具有50个等位基因,与其它家犬品种相比数量最多,而且遗传变异十分丰富,表明下司犬较其它品种具备更强的抗病适应性。

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