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十全大补汤总多糖成分抑瘤和免疫调节作用的研究

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第1章 综 述

1.中药多糖免疫调节和抗肿瘤作用的研究进展

1.1中药多糖对机体固有免疫应答的调节作用

1.2 中药多糖对机体适应性免疫应答的影响

1.3 多糖抗肿瘤作用的机制

2.十全大补汤及其组分药理作用的研究进展

第2章 实验研究

引言:

1.实验材料

1.1实验细胞株

1.2 实验动物

1.3主要试剂与药品

1.4 主要仪器

2. 实验方法

2.1 主要试剂配制

2.2 十全大补汤总多糖的提取

2.3大鼠含药血清的制备

2.4 体外实验

2.5 体内实验

2.6 数据的统计学处理

3. 实验结果

3.1 十全大补汤总多糖含药血清对H22细胞的抑制作用

3.2 十全大补汤总多糖含药血清对小鼠脾细胞增殖的刺激作用

3.3 十全大补汤总多糖含药血清对小鼠脾细胞IL-2分泌的作用

3.4 十全大补汤总多糖对H22荷瘤小鼠体重的影响

3.5 十全大补汤总多糖对H22荷瘤小鼠瘤重的影响

3.6十全大补汤总多糖对荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡的影响

3.7 十全大补汤总多糖对荷瘤小鼠脾细胞凋亡的影响

3.8 十全大补汤总多糖对荷瘤小鼠血清IL-2的影响

3.9 十全大补汤总多糖对荷瘤小鼠血清TNF-α的影响

3.10 十全大补汤总多糖对荷瘤小鼠血清IFN-γ的影响

4 讨论

致谢

攻读硕士学位期间取得的科研成果

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摘要

目的:为了研究十全大补汤总多糖成分的体内外抗肿瘤作用及作用机制,为十全大补汤的临床应用提供实验依据。
  方法:
  1.体外实验:提取十全大补汤总多糖,制备大鼠含药血清。
  1.1将1×105/ml H22细胞接种在96孔细胞培养板中,每孔100μL,分别加入10%、20%和40%浓度的含药血清,并以正常大鼠血清作为对照,检测培养后24h、48h、72h的细胞生长抑制率;
  1.2无菌操作取小鼠脾脏细胞,调整细胞浓度2×106个/ml,加入96孔培养板,每孔90μL,加入不同浓度的多糖含药血清,分别为:10%、20%和40%浓度,检测含药血清对脾细胞增殖的影响;另取24孔细胞培养板,加入上述脾细胞悬液,每孔1mL,分别加入不同浓度的多糖含药血清,培养24h后离心取上清,用ELISA法,按试剂盒说明检测IL-2,通过标准曲线计算IL-2含量。
  2.体内试验
  分别取0.2ml5×106个/ml的H22细胞,接种于小鼠右侧腋窝皮下,建成实体型荷瘤鼠模型,24h后随机分为五组,即模型对照组、顺铂(1mg/kg)组、顺铂联合高(168.4mg.ml-1)、中(84.2 mg.ml-1)、低(42.1mg.ml-1)剂量十全大补汤总多糖组。十全大补汤总多糖采取灌胃给药,0.5ml/只,1次/d,10d后眼球放血处死小鼠,称取体重和瘤重,计算抑瘤率;分离血清,并分别制备肿瘤细胞和脾细胞悬液,流式细胞仪检测肿瘤细胞和脾细胞的凋亡;ELISA法检测血清中IL-2、IFN-γ和TNF-α含量。
  结果:
  1.不同浓度的十全大补汤总多糖大鼠含药血清对H22细胞的增殖有一定抑制作用,且随着作用时间的延长,抑制率明显增加,在作用的72h最高;
  2.48h和72h的10%含药血清、20%含药血清、40%含药血清的剂量组刺激小鼠脾细胞分泌的IL-2比对照组明显增多,以40%含药血清组最强;
  3.顺铂联合各剂量十全大补汤总多糖组小鼠体重均高于顺铂组,而顺铂联合中、高剂量多糖组的瘤重均低于顺铂组;
  4.顺铂联合各剂量十全大补汤总多糖组肿瘤细胞的凋亡率明高于顺铂组,而脾细胞的凋亡率均明显又低于顺铂组;
  5.顺铂联合各剂量十全大补汤总多糖组荷瘤小鼠血清中IL-2、IFN-γ和TNF-α的分泌水平均明显高于顺铂组。
  结论:
  1.十全大补汤总多糖含药血清在体外可明显抑制H22肝癌细胞的增殖;并可促进脾细胞增殖及IL-2的分泌,呈剂量依赖性;
  2.十全大补汤总多糖可促进顺铂诱导肿瘤细胞凋亡;并能保护顺铂对脾细胞的损伤作用,促进荷瘤小鼠IL-2、IFN-γ和TNF-α的分泌,与顺铂联合应用具有减毒增效作用。

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