肝细胞生长因子和类胰岛素样生长因子对心肌干细胞的诱导作用

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背景：心肌梗死严重危害人类健康，干细胞治疗心肌梗死成为目前的研究热点[1]，心肌干细胞(cardiac stem cells，CSCs)存在于胚胎和成体心脏组织内，具有典型的干细胞特性，即克隆性、自我更新与多向分化，在特定诱导条件下可以定向分化为血管平滑肌细胞、内皮细胞及心肌细胞。生长因子能有效地动员干细胞，增强干细胞黏附力与增殖力，研究表明肝细胞生长因子(HGF)和类胰岛素样生长因子(IGF1)能够诱导多种干细胞向心肌细胞分化，但其对心肌干细胞的作用报道甚少，本实验就此问题进行研究和探讨。目的：探讨在体外，HGF和IGF1能否诱导心肌干细胞增殖并定向分化为心肌细胞，为临床应用心肌干细胞治疗心肌梗死提供必要的理论依据。方法：采用改进的组织贴块法培养心肌干细胞，酶消化法原代培养心肌细胞(Mycardialcells，MC)，免疫荧光技术鉴定心肌干细胞特异性表面标志物c-kit及血源性干细胞表面标志物CD34，流式细胞仪分选纯化得到c-kit+心肌干细胞，CFDA SE绿色荧光探针示踪培养，检测心肌干细胞的增殖情况。实验分组:1.单纯心肌干细胞组:分为四组，①对照组:心肌干细胞，不添加生长因子;②IGF1组:CSCs+100μg/L IGF1;(③HGF组:CSCs+20μg/L HGF;④HGF+IGF1组:CSCs+20μg/L HGF+100μg/L IGF1。2.心肌干细胞与心肌细胞共培养组:分为四组，①对照组:CSCs+MC，不添加生长因子;②IGF1组:MC+CSCs+100μg/L IGF1;③HGF组:MC+CSCs+20μg/L HGF;④HGF+IGF1组:MC+CSCs+20μg/L HGF+100μg/L IGF1。倒置显微镜观察细胞不同时期数量与形态的变化，活细胞工作站观察CFDA SE示踪剂荧光强弱，采集图像，进行统计学分析;免疫荧光技术鉴定心肌前体细胞早期标志物Nkx2.5，心肌细胞特异性标志Cardiac troponin T(cTnT)的表达，活细胞工作站采集图像，进行统计学分析。结果： 1.单纯心肌干细胞组:生长因子刺激后，倒置显微镜观察心肌干细胞数量与形态均无明显变化，仍保持小圆亮形态;培养5天，对照组心肌干细胞出现胞质发黑现象，之后细胞脱落漂浮，细胞大量死亡，其它三组培养无此现象，生长状态正常。活细胞工作站观察四组心肌干细胞CFDA SE荧光强度均一，无强弱变化，未发生增殖。 2.心肌干细胞与心肌细胞共培养组:各组心肌干细胞均发生增殖与形态变化，倒置显微镜观察心肌干细胞形态由小圆亮变为短梭形，或胞体比较大的圆形;活细胞工作站下观察心肌干细胞CFDA SE荧光强度有强有弱，心肌干细胞发生增殖;四组心肌干细胞Nkx2.5、cTnT均呈红色阳性表达，HGF+IGF1组有心肌干细胞分化为自发搏动的心肌细胞。结论： 1.单纯添加生长因子，能够延长心肌干细胞的存活时间，但对心肌干细胞的增殖与分化无明显作用; 2.与心肌细胞共培养条件下，肝细胞生长因子和类胰岛素样生长因子能够诱导心肌干细胞增殖，并分化为心肌细胞，但对自发性搏动的心肌细胞的诱导率是比较低的。

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作者
朱蓓蓓;
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作者单位

新乡医学院;

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授予单位新乡医学院;
学科病理学与病理生理学
授予学位硕士
导师姓名孙银平;
年度 2014
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原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类普通畜牧学;泌尿科学（泌尿生殖系疾病）;
关键词
肝细胞生长因子; 类胰岛素样生长因子; 心肌干细胞;

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