嗜线虫致病杆菌杀虫蛋白的分离纯化及杀虫蛋白基因克隆

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前言

第一章昆虫病原线虫共生菌的分离及鉴定

1.1材料与方法

1.2结果与分析

1.2.1昆虫病原线虫及其共生菌的分离

1.2.2 16S rDNA部分片段的PCR扩增

1.2.3共生菌16S rDNA部分序列分析

1.3讨论

1.4小结

第二章高毒力共生菌菌株的筛选及其杀虫活性的测定

2.1材料与方法

2.2结果与分析

2.2.1不同菌株发酵液对棉铃虫幼虫的口服杀虫活性比较

2.2.2.共生菌发酵液对不同昆虫的口服胃毒活性的比较

2.2.3.HB310菌株杀虫谱的测定

2.2.4 HB310菌株发酵液对3种十字花科蔬菜害虫的胃毒毒力比较

2.2.5 HB310菌液不同组份对菜粉蝶1龄幼虫胃毒杀虫活性的比较

2.2.6 HB310菌株生长曲线及不同培养时间对其杀虫活性的影响

2.2.7温度对HB310菌株胃毒活性的影响

2.3讨论

2.4小结

第三章HB310菌株杀虫毒素蛋白的分离纯化

3.1材料与方法

3.2结果与分析

3.2.1 HB310菌株胞内和胞外总蛋白的SDS-PAGE和native-PAGE比较

3.2.2 HB310菌株胞内蛋白粗提物和胞外蛋白粗提物的杀虫活性

3.2.3胞内和胞外胃毒素和血腔毒素的分离、纯化

3.2.4胃毒素和血腔毒素的SDS-PAGE

3.2.5toxin III 腔毒力的测定

3.2.6温度对HB310菌株胃毒活性的影响

3.2.7蛋白酶对蛋白毒素的影响

3.2.8 toxin Ⅲ毒素蛋白对大蜡螟血淋巴的影响

3.3讨论

3.4小结

第四章HB310菌株的型变及其杀虫活性研究

4.1材料与方法

4.2结果与分析

4.2.1 HB310菌株Ⅰ型菌和Ⅱ型菌的型态特征和生理生化特性的比较

4.2.2生长特性比较

4.2.3 Ⅰ型菌和Ⅱ型菌发酵液杀虫活性的比较

4.2.4Ⅰ型菌和Ⅱ型菌胞外及胞内蛋白提取物的杀虫活性比较

4.2.5 Ⅰ型菌和Ⅱ型菌蛋白质组分的差异

4.2.6 HB310菌株Ⅰ型菌和Ⅱ型菌毒力相关基因的PCR扩增

4.3讨论

4.4小结

第五章HB310菌株粘粒文库的构建及杀虫阳性克隆的筛选

5.1材料与方法

5.2结果与分析

5.2.1物理剪切后DNA大小

5.2.2文库的容量

5.2.3杀虫阳性克隆的筛选

5.2.4 pWEB216克隆的杀虫毒力

5.2.5阳性克隆杀虫毒素基因的初步鉴定

5.3讨论

5.4小结

总结

参考文献

在读期间完成的论文

作者简介

致谢