银杏叶提取物对大鼠视神经损伤后视网膜神经节细胞线粒体跨膜电位及视网膜组织中热休克蛋白表达的影响

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目的:视神经损伤是一种视力损伤严重、预后较差的视神经病变，其治疗方法少、治疗效果差。探求视神经损伤后修复再生的方法，谋求改善视神经功能的策略一直是眼科研究的热点，但目前尚缺乏安全、有效的治疗药物。越来越多的证据表明，银杏叶提取物(Ginkgo Bilobaextract，EGb761)具有抗氧化、抗缺血、保护线粒体、抑制一氧化氮合酶、抑制谷氨酸毒性以及抑制血小板活化因子等多种作用，且长期应用未发现其毒、副作用，是一种有潜力并且可以长期应用的视功能保护剂。
　　本研究通过建立大鼠视神经不完全损伤模型，腹腔注射银杏叶提取物，来观察视神经损伤后，银杏叶提取物对视网膜神经节细胞(retinalganglion cell，RGCs)线粒体跨膜电位(mitochondrial transm embranepotentials，△ψm)变化及视网膜组织中热休克蛋白(heatshock proteins，HSPs)27表达的影响，从而探讨银杏叶提取物对外伤性视神经损伤的作用，进而为银杏叶提取物临床治疗视神经损伤提供理论基础和实验依据。
　　方法:清洁级健康SD大鼠60只，雌雄不限，体重250g±10g。常规眼部检查无眼疾。随机分为3组，正常对照组（正常组）20只（20眼），实验对照组（对照组）20只（20眼），实验治疗组（治疗组）20只(20眼)。正常组不做任何处理。对照组和治疗组建立左眼视神经损伤模型，造模后1小时开始，治疗组给予0.35％银杏叶提取物(100mg/kg)，生理盐水配置腹腔注射[2，3]，对照组给予同治疗组体积的生理盐水直接腹腔注射，此后每日一次，至试验结束。于实验3d、7d、14d、28d，每组各取5眼的动物视网膜组织，用HE染色观察各组视网膜组织形态学的改变、免疫组织化学染色观察热休克蛋白27的表达情况、流式细胞术测定视网膜神经节细胞线粒体跨膜电位的变化。研究中计量资料均以均数±标准差（(x)±s））表示，采用方差分析，计数资料采用x2检验，应用SPSS13.0统计软件包进行分析，以P＜0.05为差异有显著性。
　　结果:
　　1视网膜组织HE染色
　　正常组:视网膜各细胞层、内核层及外核层的细胞排列致密，结构清晰可见，边界清楚;对照组:各时间点RGCs排列紊乱，数量不同程度的减少，在损伤3d、7d,部分细胞可出现水肿及空泡样变化，随着损伤时间延长，大鼠视网膜神经节细胞层的胞核明显变稀疏、变薄且排列紊乱，内核层和外核层也不同程度的减少;治疗组亦可见上述改变，但其各时间点均较对照组的3d、7d、14d、28d时间点损伤情况轻，其中14d损伤的情况明显明显轻于3d、7d和28d。
　　2热休克蛋白27免疫组织化学染色:
　　HSPs27的表达可位于视网膜神经纤维层，其强阳性表达呈棕色。正常组实验中所见呈现弱阳性表达浅黄色染色，各个时间点无明显变化;对照组3d为弱阳性表达呈浅黄染色，7d染色加深，14d达高峰呈强阳性表达棕色，28d染色呈浅黄色;实验组各时间点阳性表达均弱于对照组，但明显强于正常组。
　　免疫组织化学的半定量检测结果:正常组3d、7d、14d及28d的半定量检测结果分别为:0.113±0.015、0.117±0.009、0.115±0.124、0.117±0.006;对照组各时间点的半定量检测结果分别为:0.424±0.031、0.538±0.073、0.337±0.022、0.252±0.014;治疗组各时间点的半定量检测结果分别为:0.330±0.021、0.327±0.183、0.211±0.015、0.172±0.007。在实验的3d、7d、14d及28d，对照组和治疗组HSPs27的阳性表达较正常组显著升高，治疗组较对照组HSPs27的阳性表达各时间点显著降低，差别均有统计学意义(P＜0.05)。
　　3流式细胞术检测视网膜神经节细胞线粒体跨膜电位
　　正常组正常大鼠RGC△ψm为825.648±5.822;对照组:3d、7d、14 d、28d，RGC△ψm为分别为714.574±6.386、633.108±6.305、657.360±4.879、698.838±5.630，各时间点的△ψm均明显低于正常组，且各时间点间△ψm差异有统计学意义(P＜0.05）;治疗组:3d、7d、14d、28d，RGC△ψm为分别为784.879±6.424、732.538±4.851、755.698±6.993、766.769±5.134，各时间点的△ψm均低于对照组，但高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05）。
　　结论:
　　1视神经损伤后RGCs排列紊乱，细胞数量不同程度的减少。
　　2视神经损伤后视网膜组织中热休克蛋白27的表达上升，线粒体跨膜电位下降。
　　3应用银杏叶提取物治疗后可以使视网膜组织中热休克蛋白的表达下降，线粒体跨膜电位上升。
　　4银杏叶提取物参与了视神经损伤大鼠视网膜的修复过程。

著录项

作者
李志新;
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作者单位

河北医科大学;

展开▼
授予单位河北医科大学;
学科眼科学
授予学位硕士
导师姓名卞晓芸;
年度 2014
页码
总页数
原文格式 PDF
正文语种中文
中图分类中药药理学;
关键词
视神经损伤; 视网膜神经节细胞; 线粒体跨膜电位; 热休克蛋白; 银杏叶提取物; 疗效评价;

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