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第六届全国组织工程与再生医学大会

第六届全国组织工程与再生医学大会

  • 召开年：2013
  • 召开地：西安
  • 出版时间： 2013-04-18

主办单位：中国生物医学工程学会组织工程与再生医学分会

会议文集：第六届全国组织工程与再生医学大会论文集

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  • 摘要：目的:可注射水凝胶复合软骨细胞后可经微创注射在体内原位形成软骨,对修复软骨缺损具有重要的意义.本研究中尝试使用结冷胶水凝胶复合软骨细胞,构建可注射性的组织工程软骨.rn 方法:用葡萄糖溶液溶解结冷胶,将兔软骨细胞按照照5×106/ML接种入结冷胶水凝胶,加入氯化钙固化后注入裸鼠背部皮下组织,术后4、8周取材,进行大体标本观察、力学特性测定、组织学染色(HE,番红-O染色)、GAG含量测定、Ⅱ型胶原免疫组化染色.rn 结果:用葡萄糖溶液溶解、结合氯化钙固化制备出了固化过程可控的等渗结冷胶水凝胶，软骨细胞在水凝胶内分布均匀，呈典型的圆球形态。大体标本观察和组织学观察、免疫组化染色结果均证实在局部成功再造出了软骨组织，力学特性和GAG含量测定结果表明取材8周时再造出的软骨具有与正常软骨接近的弹性模量和GAG含量。rn 结论:结冷胶水凝胶混合软骨细胞注射，可在裸鼠皮下能形成富含细胞外基质的软骨组织，是一经济有效的可注射软骨构建方法。
  • 摘要：目的:体外分离纯化培养人年轻恒牙牙髓干细胞,观察细胞生长状况并鉴定其细胞表型.rn 方法:选取年轻患者因正畸拔除的前磨牙,取出牙髓,采用改良有限稀释克隆法获得单细胞悬液,原代培养.观察细胞的附着和增殖情况,并采用细胞免疫荧光及Western Blot检测细胞表面标记物STRO-1的表达情况.rn 结果:通过改良有限稀释克隆法获得人牙髓干细胞,观察细胞具有干细胞的形态特征,呈集落型生长,克隆来源的牙髓干细胞90％表达表面抗原STRO-1表达阳性.rn 结论:采用改良有限稀释克隆法可以有效的分离提纯培养出人牙髓干细胞。
  • 摘要：目的:吸烟是成人慢性牙周炎的高危因素,而尼古丁是烟草中的主要毒害物质.本研究尝试通过体外实验探索尼古丁对人牙周膜干细胞(hPDLSCs)成骨分化能力的影响,并进一步明确其具体作用机制.rn 方法:利用组织贴壁法从人牙周膜组织中分离人牙周膜细胞,有限稀释法提纯hPDLSCs进行体外培养,通过多向分化及表面分子标记物等指标对细胞干性进行鉴定.采用组织学染色,qPCR和western blot技术从不同水平检测尼古丁对hPDLSCs成骨分化的影响.检测α7nAChR蛋白在干细胞中的表达情况,利用受体阻滞剂的协同作用明确其介导的对细胞成骨能力及下游wnt信号通路相关蛋白分子的变化.利用wnt通路阻滞剂明确该信号通路对尼古丁调控hPDLSCs成骨能力的影响.rn 结果:利用有限稀释法成功获得具有多向分化潜能和间充质来源干细胞表面标志物的hPDLSCs。组织学，基因和蛋白水平证明尼古丁对hPDLSCs成骨分化能力具有负性调控作用。hPDLSCs表达α7nAChR，且通过阻断该受体，可缓解尼古丁对细胞成骨能力的阻碍作用。在hPDLSCs中，α7nAChR下游存在wnt信号通路的激活，阻断给信号通路也可在一定程度逆转尼古丁对细胞成骨分化能力的负性调控作用。rn 结论:尼古丁通过结合hPDLSCs中表达的α7nAChR，进而激活下游的wnt信号通路从而对hPDLSCs成骨分化能力产生负性调控作用。
  • 摘要：本文研究人牙周膜干细胞对同种异体B淋巴细胞功能的影响.麻醉下无菌拔除人阻生第三磨牙,轻轻剥离其周围的牙周组织,取中段牙周组织,参照以往文献报道分离并培养牙周膜干细胞.利用免疫磁珠从人外周血中分离B淋巴细胞,检测B淋巴细胞纯度、牙周膜于细胞对同种异体B淋巴细胞表型、分化和趋化功能的影响以及利用B淋巴细胞再激活实验、增殖实验、凋亡检测等实验来研究牙周膜干细胞的免疫学特性.研究表明，牙周膜干细胞对同种异体B淋巴细胞的免疫分子HLA-DR,CD40,CD80和CD86的表达无明显影响，但对B淋巴细胞的趋化作用明显减弱，同时能够明显抑制B淋巴细胞的分化功能。在牙周膜干细胞免疫学特性方面，牙周膜干细胞能够抑制B淋巴细胞增殖;与B淋巴细胞凋亡没有关系。
  • 摘要：目的:种植体植入体内后首先引起宿主局部的固有免疫反应,单核-巨噬细胞是连接固有与获得性免疫反应的桥梁,同时在调控种植体周软硬组织愈合方面起到重要作用.本研究在临床常见的纯钛牙科种植体材料表面构建TiO2纳米管阵列,尝试通过改变种植体表面微形貌调节单核-巨噬细胞的生物学功能,从免疫学角度指导牙科种植体的应用.rn 方法:应用基于HF-H3PO4电解液的阳极氧化法在纯钛表面构建出不同管径的TiO2纳米管阵列.Ficoll密度法与免疫磁珠法联用,从人外周血中纯化出CD14+的单核细胞并接种在具备不同表面微形貌的试样上,不同时长的培养后ELISA及CBA法检测不同表面形貌对单核-巨噬细胞炎性细胞因子(TNF-α,IL-1β,IL-6,IL-8,IP-10,RANKL,M-csf)分泌的影响,免疫荧光法观察细胞骨架及黏着斑形态,流式细胞术鉴定细胞分化、成熟及凋亡情况.rn 结果:与抛光组相比，小管径纳米管阵列抑制炎性分泌而大管径纳米管阵列早期促进炎性分泌;纳米管阵列表面均可明显抑制单核-巨噬细胞粘附，不同尺寸纳米管阵列在调控巨噬细胞分化方面也表现出相异性。rn 结论:对纯钛种植体表面进行不同尺寸纳米管化改性可以温和有效地调控单核-巨噬细胞功能并避免药物的干扰，是一种调控牙科种植体与宿主生物相容性的有效方法。
  • 摘要：目的:考察不同尺寸二氧化硅纳米粒子对MC3T3-E1细胞系摄取效率的差异及对成骨细胞功能的影响.rn 方法:采用改良的St(o)ber法合成了FITC标记的二氧化硅球形微粒,通过调节反应物比例调控纳米粒子尺寸.体外通过荧光显微镜、流式细胞仪结合荧光分光光度计测得摄取效率,分析尺寸对细胞摄取效率的影响.通过ALP染色和钙结节染色评价不同尺寸二氧化硅纳米粒子对MC3T3-E1细胞成骨功能的影响.MTT结合细胞凋亡检测不同尺寸二氧化硅纳米粒子的生物毒性.rn 结果:扫描电镜下所合成的二氧化硅纳米粒子尺寸分别为100nm,300nm和500nm,分散性较好，尺寸较为均一。FITC标记的Si02纳米粒子与细胞共培养后，荧光分光光度计测得随尺寸增大，材料的相对摄取率随之下降，MC3T3-E1对1 OOnm的相对摄取率最高，可到达77.1%;300nm组可达到55.4%;500nm组可达到39.3%。ALP和钙结节染色结果显示二氧化硅纳米粒子促成骨能力与剂量有关。MTT与细胞凋亡结果显示在有效浓度范围内，二氧化硅纳米粒子毒性较小，安全性较好。rn 结论:对于MC3T3-E1，三种不同尺寸的二氧化硅纳米粒子对细胞摄取和功能均有一定影响。纳米二氧化硅生物安全性较好，有较好应用前景。
  • 摘要：目的:血管内皮细胞在新生血管形成过程中扮演着主要角色,其扩增的快慢和细胞活力的强弱决定着组织工程产品血管化效果.本研究尝试利用极低频脉冲电磁场(ELF-EMF)对血管内皮细胞的增殖、细胞周期、细胞凋亡以及细胞成管能力的作用,探讨ELF-EMF能否作为一种有效的体外扩增血管内皮细胞的方法.rn 方法:利用酶消化法从人脐带中分离出人脐静脉血管内皮细胞,将获得的细胞置于频率为15Hz、磁感应强度为2.5mT的ELF-EMF中每天作用4h,用MTT和Ki-67免疫组化染色检测细胞增殖情况;用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡的变化情况.并将血管内皮细胞接种于Matrigel基质中,观察ELF-EMF对血管内皮细胞成管能力的影响.rn 结果:MTT结果显示血管内皮细胞在ELF-EMF作用下，OD值从0.362上升到0.821;Ki-67检测亦证实了这一结果，ELF-EMF处理组Ki-67阳性细胞的百分率显著地高于对照组。细胞周期结果表明ELF-EMF促使细胞从GO/G1期进入S期，促进DNA合成;而凋亡细胞比例从13.2%下降到5.7%。在ELF-EMF作用下，血管内皮细胞在Matrigel基质中形成的管腔样结构较大、更稳定。rn 结论:频率为15Hz,磁感应强度为2.5mT的ELF-EMF可以有效的促进血管内皮细胞的增殖和管腔结构的形成。表明ELF-EMF是一种快速、有效的体外扩增血管内皮细胞的方法。
  • 摘要：目的:可吸收口腔生物膜属于异种天然生物材料,不但具有良好的生物相容性和理想的机械性能,还可以引导自体细胞的长入,并逐渐降解被自体吸收.选取健康的动物组织为原材料,经脱细胞去抗原等步骤处理后,应用于犬拔牙窝填充实验,验证其有效性.rn 方法:拔除成年家犬双侧下颌第三前磨牙,用涡轮机水冷下仔细去除齿槽间隔,大量生理盐水冲洗后,左侧植入骨粉,取合适尺寸的可吸收口腔生物膜覆盖于骨粉之上,复位缝合牙龈,右侧植入骨粉后即缝合牙龈,作为对照组.术后1个月取材,组织学观察两侧新骨的生长情况.rn 结果:左侧实验组骨材料周围被大量的新生骨包围，右侧骨材料周围的新骨较少，且新骨高度明显低于实验组。rn 结论:可吸收口腔生物膜的使用可以增强新骨生成的速度，比单独使用骨粉成效好。
  • 摘要：体外研究TLR4激活后对于牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)生物学特性的影响及可能的机制.应用10μg/ml浓度的LPS体外刺激PDLSCs,CCK-8法检测其增殖能力;划痕试验检测其迁移能力;体外成骨、成脂诱导,茜素红和油红O染色及定量检测其成骨、成脂分化能力;同时检测分化过程中成骨(ALP、Runx2、Ocn、col I)、成脂(PPAR-γ,Leptin,LPL)相关的基因在mRNA,蛋白水平的变化;western blot检测PDLSCs在经LPS刺激后不同时间点NF-κB信号通路的相关蛋白表达水平变化.在成骨分化过程中加入TLR4单克隆抗体或NF-κB通路阻断剂PDTC.研究表明，LPS通过TLR4刺激PDLSCs并导致其NF-κB信号通路激活，并使其成骨能力减弱，成脂能力增强，同时伴随趋化迁移能力减弱。其成骨能力的改变与NF-κB信号通路相关。以上实验说明细菌及其产物也可直接作用于PDLSCs，引起其功能发生变化，该变化可能参与了牙周炎的发生。
  • 摘要：乳牙生理性根吸收是正常生理现象.但临床上,因基因突变而导致的颅骨锁骨发育不全(CCD)患者,口腔表现为乳牙根不吸收.目前多项研究均表明牙周膜干细胞(PDLSCs)可能参与乳牙生理性根吸收的调控,故本文目的在于比较正常乳牙、恒牙及CCD来源的PDLSCs的生物学特性.将正常乳牙按照根吸收程度的不同分为三组:未吸收组、中度吸收组及重度吸收组,加入恒牙组和CCD组作为对照,分离培养并鉴定各组PDLSCs.通过WST-1增殖实验、克隆形成实验和成骨成脂诱导实验来比较各组PDLSCs的增殖和分化特性的差异.研究表明，正常乳牙、恒牙及CCD来源的PDLSCs的生物学特性不同。未吸收组及CCD组PDLSCs增殖能力较强，CCD组PDLSCs克隆形成能力高于其他四组。中、重度吸收组PDLSCs成骨能力明显高于未吸收组和恒牙组，但其成脂能力却低于未吸收组和恒牙组;CCD组PDLSCs的成脂能力高于其成骨能力。
  • 摘要：研究复方壳多糖真皮凝胶中人皮肤成纤维细胞在不同培养基中的生长代谢特性,为复方壳多糖组织工程真皮替代物的扩大化生产奠定基础.:从小儿包皮(患者家属知情同意并自愿捐献)真皮层中分离人皮肤成纤维细胞.以方瓶作为二维培养系统,以复方壳多糖胶原凝胶作为三维培养系统,将人皮肤成纤维细胞(0.75×104/ml,1.5×104/ml凝胶)分别接种至不同培养系统中,采用12种不同的培养基进行换液培养,每隔48h换液取样,采用MTT法检测细胞增殖情况、氯胺-T法检测胶原合成情况、葡萄糖和乳酸测定试剂盒分析培养基中葡萄糖消耗量和乳酸生成量,以观察细胞的生长代谢特性,与此同时测量胶原凝胶的收缩情况.研究表明，补充脯氨酸(35mg/L)和丝氨酸(47.25mg/L)的DMEM培养基最适合复方壳多糖真皮凝胶的体外生长成熟。二维培养系统中，人皮肤成纤维细胞的比生长速率，葡萄糖代谢能量利用率高，适合大量制备组织工程种子细胞。随着胶原收缩，凝胶孔隙变小，营养物质的传递阻力进一步加大，复方壳多糖真皮在不同培养基中生长代谢情况均低于二维培养，因此，工程化组织在体外培养过程中应着重改善三维支架内的营养物质传递效率以维持细胞的活力和功能，从而加速体外熟化过程，缩短培养周期，保证功能化的真皮替代物以满足临床的移植需要。
  • 摘要：目的:本项目构建的组织工程角膜通过在在脱细胞角膜基质上复合骨髓间充质干细胞膜片制备而成.该组织工程角膜用于血管化角膜植床移植,通过BMSC膜片对植床微环境的改善,达到有效抑制角膜血管化,瘢痕化的的目的,促使支架材料与植床良好整合,达到良好的复明效果.rn 方法:取新生兔BMSC细胞在六孔板中培养12天后,孔板中的BMSC细胞形成一片具有良好韧性,且连续完整的膜片,以备后续兔眼表移植.在兔血管化眼表将ACM做板层移植,随后将培养的BMSC膜片覆盖于ACM上层,将膜片用缝线做交叉固定.以覆盖膜片组为实验组，单纯ACM移植组为对照组，评估两组间角膜上皮化，血管化以及癖痕化程度，比较观察角膜长期透明化程度。并在该过程中定点取材，分别于实验组和对照组移植后2周，4周，8周，16周取材，检测材料与植床的整合效果，并分别检测不同组别不同时间点下角膜血管化相关因子，瘢痕化相关因子和免疫相关因子的表达。rn 结果:动物实验结果显示加入BMSC膜片的实验组与对照组相比，观察期内实验组上皮化恢复程度明显加快，眼表未发生明显炎症反应，兔眼表血管化程度和瘢痕程度得到明显抑制，角膜透明度明显改善。取材结果显示实验组材料整合速度加快，无明显的炎性细胞浸润，材料未发生明显降解。rn 结论:利用脱细胞角膜基质和骨髓间充质细胞膜片构建的新型组织工程角膜是一种可用于修复复杂角膜创面损伤的角膜替代物，具有重要的临床研究意义。
  • 摘要：目的:使用经过脱细胞工艺处理的人源性羊膜材料对鸡趾深屈肌腱进行肌腱断裂吻合术后的防粘连效果实验,验证材料的防粘连效果,为临床术后预防肌腱粘连提供实验数据.rn 方法:常规戊巴比妥肌肉注射麻醉,消毒后取鸡的左足第三趾.无菌条件下侧方"L"性切口,暴露趾的趾浅及趾深屈肌腱,切开鞘管,肌腱横面1/2处锐性损伤趾深屈肌腱(勿损伤趾浅屈肌腱),以10-0单股聚丙烯缝合线进行腱内缝合,缝合后用制备的脱细胞羊膜材料,对缝合处进行缠绕包裹3圈.后用6-0单股聚丙烯手术线做腱鞘、腱周缝合.清理止血后采用4-0丝线对外部伤口行缝合.对照组除不进行羊膜包裹外,其余操作步骤与实验组相同.rn 结果:术后2周、4周、6周、8周取材进行大体和组织学观察，观察手术部位的肌腱愈合状况、组织粘连情况、炎症反应。术后各时间点实验组和空白组肌腱吻合处炎症细胞浸润状况、肌脏愈合进程无明显差别;趾深屈肌腱粘连的半定量评分结果表明实验组(有效率88%，7/8)和对照组(有效率12%，1/8)差异有统计学意义(P＜0.05)。rn 结论:脱细胞生物羊膜能够有效预防肌腱粘连，是一种较为理想的预防肌腱粘连的生物材料。
  • 摘要：目的:通用化组织工程骨是一种应用于同种异体,可标准化制备并储存,临床治疗上即需即取的再生医学产品.而制备这种组织工程骨,选取一种体外成骨能力强,免疫原性低,来源广泛的种子细胞是首要关键.为此尝试在山羊动物模型上,对比胎龄期骨髓间充质干细胞(Fetal BMSC),成年期骨髓间充质干细胞(Adult BMSC),以及脐带干细胞(Umbilical MSC)体外细胞增殖能力及成骨能力差异并建立相应种子细胞库,为后续研究做准备.rn 方法:人工授精法获取孕期90天的孕山羊，剖宫产手术取出胎羊。注射器四肢骨抽取骨髓，并全骨髓贴壁法体外培养;将脐带剪碎，利用胶原酶消化贴壁法获取脐带干细胞;另选择年龄1岁-2岁成年山羊，骼前上棘穿刺抽取骨髓，贴壁培养。通过观察三种细胞的集落形态，生长曲线，克隆形成率，三向诱导来比较体外增殖能力及成骨差异。rn 结果:胎龄期的骨髓间充质干细胞呈成纤维细胞样生长，生长速度，克隆形成率均高于成年期骨髓间充质干细胞和脐带干细胞，同时三向诱导也证实其有较强的成骨分化能力。rn 结论:胎羊来源的骨髓间充质干细胞是一种增殖能力强，具有高分化潜力，与骨组织工程材料复合紧密，同时适合冻存建库的良好的种子细胞来源。
  • 摘要：众多研究表明,生物电信号能够调控成骨细胞的生长和分化,显示了良好的骨组织工程应用前景在各种电信号刺激的参数中,频率的选择是一个至关重要的因素.本研究的目的就是研究不同频率的电刺激信号对小鼠成骨细胞(Mc-3T3-E1)成骨相关基因表达的影响,探索控制成骨细胞生长与分化的电信号条件.将24孔细胞培养板改装成体外培养细胞的电刺激装置,不同频率的电信号由函数信号发生器产生,电信号用示波器实时监控.使用不同频率的脉冲电刺激作用于Mc-3T3-E1细胞,每天刺激30分钟,持续刺激1到12天.频率范围是1Hz到100KHz,占空比为50％,电压为200mV/cm.细胞增殖率用MTT法检测,成骨相关基因表达水平用Realtime PCR法检测,ALP含量用Fast Blue RR salt染色.通过细胞的成骨相关基因表达、细胞增殖以及ALP染色结果分析，当频率为100Hz时，电刺激促进Mc-3T3-EI细胞向成骨细胞分化的作用最为显著。
  • 摘要：目的:模拟体内微环境,探讨兔坐骨神经匀浆上清液对脂肪干细胞的诱导分化作用.rn 方法:用钳夹法建立兔坐骨神经损伤模型,并采用组织匀浆器制作神经匀浆,高速离心取其上清液.从兔颈背部脂肪中分离培养脂肪干细胞并传至P3代,诱导前24h加10ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)入培养液中以促分裂,再以正常坐骨神经、损伤3d、损伤7天及损伤14d坐骨神经匀浆上清液作为诱导剂进行诱导.诱导后观察细胞的形态变化;MTT法测定不同诱导剂诱导后细胞活性;免疫细胞化学染色检测细胞中S-100、神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况;RT-PCR检测诱导前后细胞的GFAP及S-100的变化.rn 结果:加入神经匀浆诱导后24h，部分细胞的形态已发生改变，4d后大部分细胞不仅在形态上表现为许旺样特征，而且5-100及GFAP等特异性抗体呈阳性表达，RT PCR结果也显示诱导组GFAP, S-100的表达增高，且损伤7d组阳性率最高。rn 结论:损伤坐骨神经匀浆上清液能够将脂肪干细胞诱导为类许旺细胞。
  • 摘要：目的:使用脱细胞粘膜基质是快速有效修复各类组织缺损的重要生物材料,而材料在组织修复过程中发挥的抗菌性能在修复过程中发挥重要作用.用脱细胞粘膜基质体外降解产物来进行体外抗菌研究,为材料抗菌应用提供依据.rn 方法:利用胶原酶降解脱细胞粘膜基质,使用金黄色葡萄球菌,大肠杆菌和绿脓杆菌作为目标菌,体外抗菌状况使用荧光显微镜、扫描电镜观测.并且检测抗菌时间和分析菌落增值数量来评价抗菌效果.rn 结果:在金黄色葡萄球菌，大肠杆菌和绿脓杆菌亦菌试验中，脱细胞粘膜基质降解产物能有效抑制细菌生长，在抗菌过程中达到很大的抗菌效价，并且表现出较强的抗菌能力。rn 结论:利用脱细胞粘膜基质体外降解产物能够有效达到抗菌目的，为材料用于感染组织损伤缺损修复提供试验基础。
  • 摘要：目的:长期非生理性应力所致的疲劳性骨折、肌腱末端病、关节盂唇损伤、韧带损伤等运动性损伤严重影响患者生活质量,治疗周期和康复时间长,疗效欠佳.尝试使用自体血提取和激活后的富细胞因子的缓释纤维蛋白胶刺激局部组织再生,促进伤口愈合.rn 方法:针对3名运动员分别患有单纯胫骨骨折不愈合、髌腱末端病、或肩关节盂唇损伤、肘关节内侧副韧带损伤联合踝关节创伤性骨关节病,在血细胞分析仪的辅助下,从患者自体血中提取和浓缩血小板,在激活或非激活状态下行患部单点或多点注射治疗.患者治疗前后进行X线检查和/或心理量表评分、运动水平评分、疼痛评分及关节功能评分等等.rn 结果:病例一为右腿胫骨骨折不愈合11月余，骨折处注射富细胞因子的缓释纤维蛋白胶后2-3天疼痛消失，3周后X线检查骨皮质己连续，运动功能正常;病例二为右膝髌键末端病，病例三为肩关节盂唇损伤、肘关节内侧副韧带损伤联合踝关节创伤性骨关节病，2患者均为患处局部注射浓缩细胞因子，疼痛在术后数天内缓解，3周后复查关节运动功能恢复正常，所有评分明显提高。三人现均已恢复正常训练并参加赛事。rn 结论:利用自体高浓度细胞因子及纤维蛋白胶可以有效缓解运动性损伤所致疼痛，促进损伤修复。
  • 摘要：在同种异体椎间盘移植的基础上,探讨用基因修饰的犬髓核细胞与同种异体椎间盘复合的方法阻止或延缓同种异体椎间盘移植后出现的退变性问题的能力.将18个犬椎间盘置于冻存液中于-196℃冷冻保存2m,随机分为A、B、C三组,A组以rAAV2-hBMP7转染犬髓核细胞,体外培养至7天,B组注入未转染髓核细胞体外培养,C组以20ul生理盐水注射体外培养.将A、B和C三组椎间盘分别移植至18只Beagle犬L4-5椎间盘,在术前、术后2w、1m、3m和6m通过影像学分析移植椎间盘情况;于术后6m处死,通过MTS分析腰椎屈伸、侧弯及扭转的变化;通过HE及胶原染色观察移植椎间盘的形态学改变;对于A和B组椎间盘中注射的髓核细胞在注射前以PKH-26标记,通过荧光显微镜观察外源性髓核细胞的存活情况;并通过PCR法检测三组髓核组织中hBMP7 mRNA的表达.通过将hBMP7基因修饰的髓核细胞同同种异体椎间盘复合后在行异体移植的方法能明显延缓单纯的同种异体椎间盘移植后的退变性问题。但需要大规模的动物实验进行相关结果的进一步验证。
  • 摘要：目的:本研究旨在检测p75NTR在毛囊发育及成熟后的周期性变化过程中的表达情况,并进一步确定p75NTR与已知的毛囊干细胞标志物的共定位情况,最后通过体内实验检测p75NTR阳性和阴性毛囊细胞的成毛能力,以证明p75NTR阳性毛囊细胞的干细胞特性.rn 方法:首先检测从新生到生后56天这一漫长过程中不同时间点p75NTR在C57小鼠背部毛囊中的表达情况,并检测其与毛囊标志物K14,K15的共表达情况,通过流式分析检测p75NTR在不同毛囊不同周期的表达量,最后将流式分选得到的阳性细胞回植于裸鼠体内观测其成毛能力.rn 结果:从新生到毛囊成熟的漫长过程中p75NTR的表达呈现周期性的规律变化，并且其与已知的毛囊干细胞标志物有一定的共表达，最重要的是p75NTR阳性细胞能够参与形成毛囊及皮脂腺、汗腺等毛囊附件，甚至形成表皮。rn 结论:p75NTR可能是一个合适的毛囊干细胞的分选标志。
  • 摘要：目的:研究反复冻融结合核酸酶处理对小牛跟腱脱细胞效果以及肌腱组织形态、结构、生化成分和力学特性的影响.rn 方法:取新鲜新生小牛跟腱48根,随机分为3组(n=16):新鲜正常肌腱作为对照组1(A组),反复冻融5次(液氮冷冻/37℃复温)作为对照组2(B组),反复冻融结合核酸酶处理24h作为实验组(C组).每组4根用于形态学、组织学以及免疫组化观察,其余12根用于DNA含量和生物力学特性检测.rn 结果:SEM观察结果显示A,B组胶原纤维排列致密有序，形态完整，未见断裂或缺损;C组的胶原纤维排列松散，几乎没有断裂或缺损。阿利新蓝、天狼星红染色以及免疫组化结果显示C组糖胺聚糖、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白大部分被保留。H&E和DAPI染色结果显示A,B组胶原纤维之间较多完整的细胞核清晰可见，而C组胶原纤维之间未见完整细胞核，但腱内膜上仍有部分细胞核残留。DNA定量检测结果证实C组DNA含量明显低于A,B组(P＜0.05)。生物力学测定结果显示，各组拉伸强度、断裂应变、刚度和弹性模量数值均有差异，但差异均无统计学意义(P＞0.05)。rn 结论:反复冻融结合核酸酶处理完整的小牛跟腱，可有效地去除细胞成分，同时基本保留跟腱原始的胶原纤维结构、形态、大部分胞外基质成分和力学特性，可望用于肌腱/韧带缺损的修复材料。
  • 摘要：中空介孔硅纳米粒子(HMSNs)具有密度低、比表面积大和可封装多种客体分子等优点,在药物控释等领域有着广阔的应用前景.本实验自行合成两亲嵌段共聚物模板剂,通过改变合成物添加量制备具有不同壁厚的HMSNs,并研究其作为药物载体的药物控释行为.以合成的聚苯乙烯-聚丙烯酸(PS35-b-PAA4)两亲嵌段共聚物及阳离子表面活性剂十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)作为双模版,通过改变PS35-b-PAA4的添加量制备不同壁厚的HMSNs.用TEM、DLS进行表征.选用盐酸阿霉素(DOX)作为模型药物,考察HMSNs的载药性能及药物释放行为.通过控制嵌段聚合物的添加量可以得到不同壳层壁厚的HMSNs。壁厚越大，药物装载量也越大。在酸性条件下，药物释放量随HMSNs壁厚的增大而增加，但等壁厚在酸性环境比碱性环境中释放得快。因此，本研究结果对HMSNs作为药物载体在癌症治疗方面具有一定的理论指导意义。
  • 摘要：目的:采用脱细胞膀胱冻干粉复合羟基磷灰石粉末修复非承重骨缺损.rn 方法:选用新鲜的猪膀胱为原料,机械剥离膀胱粘膜层,通过脱细胞、除抗原、粉碎等处理,再与羟基磷灰石粉末按照比例混合,制成生物复合材料.对成年健康新西兰兔进行尺骨缺损修复填充手术,验证材料有效性.rn 结果:分别在术后2个月、6个月、9个月和12个月时取材观察,骨缺损逐步修复.影像学和组织学评价结果显示,材料逐步被机体替代修复,从植入2月时,材料的有机成分(脱细胞膀胱)就开始被机体吸收替代,而在6个月时,材料的无机成分(羟基磷灰石)才观察到明显的吸收替代现象.表面材料在愈合全程发挥修复作用.rn 结论:脱细胞膀胱冻干粉复合羟基磷灰石粉末可以用于骨缺损修复。
  • 摘要：本课题利用多糖生物相容性好、易降解、无毒等有点，将以具有超支化结构的天然多糖-糖原为原料，合成一系列带胺基基团的超支化阳离子糖原衍生物，并在293T和CNE2细胞体系中研究它们的基因转染性能。本研究采用羰基二咪唑(CDI)活化法合成超支化糖原衍生物DMAPA-glc系列，通过红外光谱法(FTIR)检测和核磁共振氢谱分析检测其结构特征，测定其zeta电位在30左右，粒径大小为200nm左右。将DMAPA-glc与EGFP-NI质粒包裹组装形成纳米小球，分别转染293T细胞和CNE2细胞，用研究级倒置荧光显微镜观察GFP绿色荧光蛋白的表达情况，和流式细胞仪测定转染率，发现DMAPA组转染293T的转染率能达到80%，转染CNE2细胞能达到50%;基因转染效率较高，与阳性对照组PEI相当。用MTT,溶血实验等研究发现，DMAPA-glc组的细胞毒性大大低于同浓度的PEI, PEI在较低浓度就能引起红细胞的聚集粘附，干扰红细胞正常形态和功能，而MAPA-glc与红细胞共培养时显示出的生物相容性，具有较好的应用前景。
  • 摘要：目的:同时分离和培养兔骨髓来源的内皮祖细胞(EPCs)和平滑肌祖细胞(SPCs),研究其生物学特性,评估其作为组织工程化静脉瓣种子细胞的可能性.rn 方法:密度梯度离心法获取骨髓血单个核细胞,分别用两种培养基向EPC和SPC方向诱导培养;分别观察两类细胞的形态特征与超微细胞结构,检测表面标志物的表达情况;检测细胞摄脂及成血管功能.rn 结果:EPCs培养10天呈“铺路石”状;透射电镜可见胞浆内特征性W-P小体;表达CD34,VEGFR-2，弱表达CD133;具有摄取DiI-ac-LDL和结合FITC-UEA-1的功能，在Matrigel上呈现血管状。SPCs培养14天左右呈“峰-谷”样生长;透射电镜下可见肌丝;表达CD34,SMA，不表达U10和VEGF-2;无摄脂及成血管功能。rn 结论:兔骨髓来源的单个核细胞，可同时诱导培养获得EPCs和SPCs，可作为构建组织工程化静脉瓣的种子细胞。该方法省时、经济。
  • 摘要：目前生物心脏起搏器的研究主要集中在过度表达起搏基因和基因修饰的干细胞移植两种策略,但是基因的安全性和短期表达性等问题限制了其在生物起搏治疗中的应用.理想的策略应该是,通过微环境的控制转变干细胞为起搏细胞进行生物起搏治疗.本研究的目的是,检测通过共培养的方法是否可以诱导MAPC为起搏细胞.结果显示:骨髓源性MAPC和窦房结细胞共培养四周后HCN2andHCN4表达增高,Kir2.1and Kir2.2表达减少;尤其是共培养后的MAPC产生了窦房结样的动作电位,并可以驱动静息心肌的搏动.上述结果表明,与窦房结细胞共培养可以诱导MAPC分化为起搏细胞.
  • 摘要：目的:毛囊、汗腺等附属器官的构建是实现皮肤完全再生的一大挑战.本研究将肝细胞生长因子质粒DNA(pDNA-HGF)引入胶原/壳聚糖支架,制备了一种基因活性皮肤再生材料(GAS),以实现HGF质粒的原位转染和表达,系统研究了该GAS体外诱导骨髓间充质干细胞(BMSC)向毛囊细胞分化的性能,以期用于皮肤再生中毛囊的重建.rn 方法:将DNA浓度20 μg/mL的pDNA-HGF/脂质体复合纳米粒子悬液100 μL导入胶原/壳聚糖多孔支架,得到GAS.然后,将250万/mL BMSC悬液100 μL种于GAS,体外培养3周.利用免疫荧光染色,观察BMSC在GAS中的形态.采用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测GAS中BMSC表达毛囊细胞相关基因的水平.采用Western blotting(WB)检测GAS中HGF和毛囊细胞相关蛋白的表达量.rn 结果:BMSC能在GAS中保持良好的细胞形态。在培养1w和3w时，GAS中HGF的表达量均明显高于相应对照组。BMSC向毛囊细胞分化信号因子碱性磷酸酶(Alkalinephosphatase)、多能蛋白聚糖(Versican)和Ⅳ型胶原(Collagen Ⅳ)的基因和蛋白表达水平，在GAS中都明显提高。其中1w时，实验组中，Versican关键基因的表达量是对照组的18倍。rn 结论:pDNA-HGF活化的胶原/壳聚糖支架能够有效促进BMSC原位表达HGF，进而诱导BMSC向毛囊细胞分化，对于实现皮肤修复中毛囊再生具有潜在应用价值。
  • 摘要：探索京尼平交联脱细胞猪角膜基质(Gc-APCS)使之染色进而用作美容性角膜镜片的可行性.在适宜的交联反应条件(37℃,pH值为5.5)下,使用1.0％京尼平水溶液处理脱细胞猪角膜基质(APCS)4 h,并行-10℃冷冻干燥以制备美容性角膜镜片,并对制备所得Gc-APCS的理化性能和生物学特性进行评价.京尼平交联脱细胞猪角膜基质制备了美容性角膜镜片。京尼平是良好的天然交联剂，交联APCS后:未影响孔隙结构和微环境，提升了稳定的力学性能保持了较好的溶胀性能，具备了良好的抗降解性能Gc-APCS植入体内后:生物相容性良好，染色稳定，基质愈合良好，可用于移植治疗角膜白斑。
  • 摘要：目的:研究大鼠牙髓暴露致牙髓炎过程中串珠素在牙髓损伤修复过程中的表达和作用.rn 方法:通过开髓建立大鼠牙髓炎模型,术后1、3、5、7d取标本,脱钙后石蜡包埋,4μm切片,用免疫组织化学染色方法研究串珠素的时空表达变化.rn 结果:牙髓损伤后1d,串珠素于穿髓点附近的炎症细胞浸润区下方的牙髓组织阳性表达.牙髓损伤后3d,串珠素的阳性表达位于炎症细胞浸润区及与固有牙髓交界处的牙髓组织,牙髓与牙本质交界处也有阳性表达.牙髓损伤后5d,炎症细胞浸润区串珠素的弥散性阳性表达.牙髓损伤后7d,串珠素在炎症细胞浸润区与坏死组织交界处有强阳性表达.对照组正常牙髓组织串珠素有弥散性弱阳性表达.rn 结论:在牙髓损伤应激情况下，串珠素在牙髓组织中阳性表达较强的位置，逐渐由炎症细胞浸润区域内侧的固有牙髓向炎症细胞浸润区及其外侧的组织坏死区转移，这对于启动牙髓自我修复、诱导牙髓细胞功能性分化，炎症细胞的渗出和浸润以及其组织再生可能具有重要作用。
  • 摘要：目的:探讨去分化脂肪(dedifferentiated fat,DFAT)细胞向心肌细胞分化的可能性,旨在为治疗心肌梗死、心脏生物起搏器的构建提供新的种子细胞.rn 方法:用天花板培养法分离获得大鼠DFAT细胞并鉴定;5-AZA、EBIO、与新生鼠窦房细胞共培养等方法对DFAT细胞进行诱导,观察形态变化,用RT-PCR和免疫细胞化学检测心肌和起搏细胞标记物,并将其与静息心室肌细胞共培养观察其带动心肌细胞跳动的情况.rn 结果:获得的DFAT细胞与间充质干细胞类似，可以表达CD29, CD44和CD90，但不表达CD31和CD34，可以向脂肪细胞和骨细胞方向分化。在培养中未发现自发性搏动的细胞。5-AZA、EBIO、与新生鼠窦房细胞共培养诱导后，细胞变大，并呈长梭形，表达心脏早期标志基因GATA-4和Nkx2.5、心肌相关标志基因HCN、Cx和Tn等;免疫细胞化学显示诱导后细胞可以表达起搏细胞相关标志物HCN,Cx和Tn;5-AZA诱导的细胞与静息心室肌细胞共培养后未发现自主搏动的细胞，而与窦房结共培养的DFAT细胞可以带动静息心室肌搏动。rn 结论:5-AZA、EBIO与窦房结细胞共培养都可以将DFAT细胞诱导分化为具有一定心肌细胞、起搏细胞表型的细胞，而与窦房结细胞共培养的DFAT细胞还可以带动静息心室肌搏动，更接近起搏细胞。
  • 摘要：目的:植入体内后X-射线影像显示欠清晰和表面疏水性是外科常用硅橡胶材料的生物相容性缺陷,本研究旨在探索硅橡胶影像可视性增强和表面亲水改性的可行性.rn 方法:用甲基乙烯基硅橡胶与纳米零价铁颗粒共混进行本体改性,质量配方比硅橡胶:纳米零价铁为99:1,98:2...76:24,75:25;得到25组甲基乙烯基硅橡胶/纳米铁杂化材料(INESR),使用空气介质阻档辉光放电(ADBGD)装置对复合材料表面处理,X-线计算机断层扫描仪(CT)观察INESR在体外的影像和测量CT值,X-线摄片仪透照INESR在动物体内的影像,表面接触角分析仪测量INESR试件表面改性前后的去离了水接触角并记录水滴形状,扫描电镜和透射电镜分别表征纳米铁在硅橡胶表面和基胶内的分散状态.rn 结果:纳米铁的份数＜15份时，纳米铁在基胶中分散均匀，甲基乙烯基硅橡胶填入纳米铁粉后X-线影像可视性获得显著增强，杂化材料表面水接触角比甲基乙烯基硅橡胶的缩小了50%以上，表面由疏水性变为亲水性。rn 结论:制备出影像可视性增强和表面亲水性双功能硅橡胶可行。
  • 摘要：人工血管研究是一个多学科交叉方向,它涉及材料、细胞、生长因子、组织工程构建、生物医学评价等方面.设计和制备符合血管要求的支架材料,不仅需要考虑孔结构、力学性能和降解性能等,还需要考虑细胞能否在支架材料内存活、增殖和分化,细胞能否向支架材料内部迁移.为此需要在制备支架材料时复合和添加天然的细胞外基质、信号分了和生长因子、与细胞粘附相关的蛋白和多肽等,构建适合细胞生存的微环境.对血管材料进行活性和功能修饰,使材料获得优良的抗凝血性能,并能够捕捉循环干细胞和趋化细胞迁移,使支架材料具有组织再生诱导活性,快速实现血管内皮化和平滑肌再生,保持血管长期通畅.rn 在人工血管研究方面，发展了研究团队，建设了研究平台，开展了新型可降解高分子合成、支架材料结构设计与加工、功能化修饰、内皮干细胞捕捉、细胞示踪、体内移植与功能评价等。发展了多种先进方法和技术，包括静电纺丝血管支架的致孔技术、活性分子梯度固定技术、基于自组装多肤水凝胶的材料表面RGD修饰技术、基于环糊精和金刚烷主客体自组装的材料表面修饰技术、基于两亲性蛋白功能界面的活性蛋白固定技术、一氧化氮可控释放支架材料等。开展了小动物人工血管植入研究，获得了性能良好的人工血管材料。
  • 摘要：目的:构建一种具有刚度梯度的三维骨支架,并考察其对间充质干细胞增殖分化的影响以及组织相容性,以期探索一种高效骨修复方法和提高大块骨修复重建质量.rn 方法:采用猪的脱细胞松质骨作为三维支架,将不同配比浓度的胶原/羟磷灰石溶液通过灌流的方式表衬在三维支架表面,冷冻干燥后形成具有不同刚度梯度的三维支架.体外将大鼠间充质干细胞种植在支架上观察细胞的粘附、增殖及成骨分化能力.大鼠体内皮下实验考察支架与组织的相容性以及血管生成能力等.rn 结果:构建的三维支架材料具有良好的孔隙率以及孔径值，并在材料表面形成了刚度梯度。大鼠间充质干细胞在体外可以很好的与支架材料复合，高刚度的三维支架材料具有诱导细胞向成骨方向分化的能力。体内实验证明了支架材料与组织具有良好的相容性，并生成了微血管。rn 结论:所构建的三维支架材料有利于三维培养间充质干细胞，且适宜刚度可促使其向成骨分化，在体内该三维支架也可为细胞提供良好的微环境。
  • 摘要：目的:有机/无机复合材料不仅能够保持各组分的特性,通过适当的复合技术可在不同组分间产生协同作用,因而具有较好的力学、热学和生物学等性能.介孔硅纳米粒子(MSNs)因其具有比表面积高、比孔容大、孔道均一可调及表面易修饰等特点被广泛应用于药物传递和癌症治疗等领域.本文采用静电混纺技术将MSNs加入到有机聚合物左旋聚乳酸(PLLA)中,以制备一种包含载药MSNs和PLLA的复合载药纳米纤维(PLLA/MSNs).rn 方法:采用经典的模板提取法制备粒径均一的MSNs。将MSNs以不同的浓度(2,5,10,15,20和30 wt%)加入10 wt% PLLA/氯仿混合液中，搅拌均匀。电纺溶液在电压为10 kV，推进速率为1 mL/h，接收距离为15 cm的条件下制备复合纳米纤维。rn 结果:在给定的实验条件下，所制备的MSNs比表面积为972.58 m2/g、平均孔径为2.5nm且平均粒径约为54 nm。随着复合纳米纤维中MSNs比例增加，纤维表面变得粗糙不平整，纤维直径分布范围变宽，拉伸强度随之变差，当粒子浓度为10%时纤维的平均拉伸强度为1.42 MPa。在较低浓度下，MSNs能均匀分布在PLLA纤维中，然而，当掺入MSNs的比例大于15 wt%时，MSNs很容易聚集在PLLA纳米纤维中。rn 结论:通过静电纺丝法成功制备出PLLA/MSNs复合纳米纤维，MSNs的最佳浓度为10 wt%。这种有机/无机复合纳米纤维可用于药物、基因和蛋白质等药物释放。
  • 摘要：目的:以聚乙烯醇(PVA)、糖胺聚糖(GAG)和胶原(COL)为主要组分,采用冷冻干燥法制备PVA-GAG-COL多孔复合支架,探讨其作为组织工程支架材料的可行性.rn 方法:不同浓度和醇解度的PVA与GAG、COL按一定比例复合,用冷冻干燥法制备PVA-GAG-COL多孔复合支架.通过扫描电镜观察样品横截面的组织形态.通过改变PVA的浓度和醇解度,得到不同配比的复合支架,不同配比的复合支架具有不同的内部形态.rn 结果:扫描电镜观察显示,复合支架材料内部形成大量的多孔网络结构.rn 结论:聚乙烯醇与糖胺聚糖、胶原复合,可形成高含水率的多孔复合支架,具有良好的细胞相容性,形成的多孔结构适合组织工程支架的细胞培养.
  • 摘要：通过在骨组织/细胞力学生物学、计算生物力学等方面的研究,探讨骨重建的生物力学机理.采用灌注式三维骨组织培养生物反应器,Micro-CT扫描、Minics三维重建、ANASYS有限元计算确定三维支架材料内部细胞受到应变作用强度、单向应变作用下骨细胞共培养体系等研究平台和技术,以及力学生物学、计算力学方法,研究力学载荷对三维支架中培养的成骨细胞、离体和在体骨组织重建的影响;进行力学刺激对成骨细胞、破骨细胞及其共培养体系生长和分化的影响的研究,揭示其中的重要信号途径;进行骨折的预测和骨折患者松质骨结构和性能研究.从在体、离体、细胞水平初步探讨骨重建的生物力学机理，为再生医学、组织工程的发展提供了研究基础。
  • 摘要：目的:合成并筛选出成胶能力强的多肽成胶因子,同时应用于细胞的三维培养方面.rn 方法:通过固相合成的方法合成成胶前体分子,并通过酶催化方法促使水凝胶的形成,通过透射电镜,荧光和流变等技术表征得到的多肽水凝胶,并通过水凝胶模拟细胞外基质,来研究细胞在水凝胶内的行为.rn 结果:经过合理的设计多肽,得到一系列成胶性能比较好的成胶分子,该类分子可以通过酶催化这种温和的方法形成水凝胶,并筛选得到最低成胶浓度为万分之一(即一毫克该化合物可以包裹10升的水)的多肽水凝胶,而且初步得到了水凝胶的毒性数据.rn 结论:筛选得到的水凝胶不仅成胶方法温和，而且具有目前为止最低的成胶浓度，并且发现了最低成胶浓度低于其半数致死率的成胶因子。该类水凝胶能均匀包裹细胞，有望在干细胞治疗和细胞三维培养方面得到应用。
  • 摘要：目的:生长因子参与细胞分化、增殖、基质合成和调控等许多方面,对组织的重新构建及其重要.但生长因子在体内扩散快、对热和酸敏感、易被蛋白酶分解、半衰期短,利用率低.rn 方法:利用复乳化-溶剂挥发法制备BMP缓释微球,分别以PLGA、端氨基N-PLGA、肝素化的端氨基Hep-N-PLGA三种聚合物实现BMP的微球化包埋.通过PBS缓冲溶液中恒温震荡,Elisa试剂盒检测体外释放性能;利用MTT法检测微球样品(4℃密封保存)中BMP的活性稳定性.rn 结果:三种微球的成球性均较好，直径大致在0.5-5μm。肝素化改性可有效降低缓释微球的突释，延长有效释放时间，且有利于微球中BMP活性稳定性的提高。其1.5d的释放率由18%下降到11%,43.5d释放量由74%下降到61%; 4℃密封保存4个月时，其BMP活性稳定性高达原样品的63%，而PLGA组的BMP活性不足35%。rn 结论:PLGA的肝素化改性有利于BMP的控制释放及活性稳定性的提高，利用肝素化的PLGA实现生长因子的包埋固定，更有利于生长因子生物学效应的充分发挥和组织的修复重建。
  • 摘要：凝胶支架具有类似活组织的水合微环境,在体内易于成胶及塑形等优点已成为组织工程支架的研究热点.天然生物高分子材料壳聚糖(CTS)是构建组织工程水凝胶支架的常用材料.然而,目前利用壳聚糖制备的水凝胶支架存在力学性能较低的缺点,难以满足组织工程对生物材料支架的力学性能要求.针对上述问题,本研究采用柠檬酸改性壳聚糖并制备成水凝胶结构;对改性后壳聚糖水凝胶的理化性质和生物相容性进行评价,以求发展一种性能优良的组织工程支架.对壳聚糖进行柠檬酸化改性，冷冻后碱处理获得样品。通过扫描电镜观察改性前后壳聚糖水凝胶的形貌;红外光谱检测柠檬酸对壳聚糖的化学改性作用:X-射线衍射分析结晶性;DSC分析热性能;并检测壳聚糖改性前后的力学性能;最后，对柠檬酸化壳聚糖水凝胶的细胞/生物相容性进行评价，用传统方法制备的壳聚糖水凝胶作为对照。研究结果表明，与传统方法制作的壳聚糖水凝胶相比，本实验采用柠檬酸化改性可以较好提升壳聚糖水凝胶的理化性能并具有较好的细胞/生物相容性，这为今后研究制备基于壳聚糖水凝胶的一类新型仿生支架提供了可能。
  • 摘要：目的:探讨PHBHHx作为软骨细胞移植载体材料的生物相容性研究及可行性.rn 方法:①应用溶剂挥发的方法制备PHBHHx膜及PHBV膜,经乙醇及紫外线处理后分为两组,一组膜表面孵育Phap-RGD融合蛋白.扫描电镜观察两组膜表面形态;②以人鼻中隔软骨细胞为种子细胞,将其分别接种在PHBV、PHBHHx膜及孵育过蛋白的膜表面上进行培养,倒置显微镜下观察其对细胞的吸附能力,MTT检测其对软骨细胞的增殖能力;并通过甲苯胺蓝染色、免疫细胞组化及扫描电镜观察分析PHBHHx生物膜材料对促进基质分泌,维持软骨细胞特性的能力.rn 结果:通过甲苯胺蓝染色、免疫细胞组化及扫描电镜观察分析证实接种在PHBV,PHBHHx生物膜上的软骨细胞维持了其良好的特性，并促进了基质的分泌，MTT检测证实其对软骨细胞增殖有促进作用;实验显示表面孵育有Phap-RGD的PHBHHx生物膜对软骨细胞增殖的促进作用更加明显，其对软骨细胞的特性维持的更好。rn 结论:PHBHHX与软骨细胞具有较好的生物相容性，有Phap-RGD融合蛋白修饰的PHBHHx复合材料更适合作为软骨组织工程中的细胞培养材料，是一种较为理想的天然生物移植载体材料。
  • 摘要：目的:静电纺丝制备pNSR16/PCL/Gt(蛛丝蛋白/聚己内脂/明胶)复合纳米纤维小直径血管支架,对所制备支架的遗传毒性及细胞相容性进行表征.rn 方法:采用单细胞凝胶电泳试验评价遗传毒性,通过硝酸还原酶法测定内皮细胞在支架上的一氧化氮(NO),明胶酶谱法检测明胶酶的表达以及免疫荧光F-actin骨架蛋白表达研究支架的细胞相容性.rn 结果:支架浸提液不仅没有造成内皮细胞的DNA损伤,而且能促进内皮细胞释放血管活性物质NO(90.48±6.12 vs对照组76.19±4.08,P＜0.05),并支持内皮细胞强烈表达F-actin骨架蛋白(46.85±1.12 vs对照组19.52±2.48,P＜0.01),其明胶酶表达特性也未受影响(2.3602±0.0015 vs对照组2.3358±0.0013,P＞0.05).rn 结论:pNSR 16/PCL/Gt小直径血管支架有形成具“生理功能”的组织工程化血管的潜力。
  • 摘要：本研究团队独立自主研发的去细胞同种异体神经修复材料(商品名:神桥),在完成前瞻性多中心对照临床研究,取得良好的修复效果的基础上,获得的国家食品药品监督管理局颁发的产品注册证,实现了规模化生产,正式在临床上推广使用;为了进一步提高去细胞同种异体神经修复材料修复周围神经缺损的效果,采用各类促神经再生物质复合到去细胞同种异体神经的方法,提高其修复性能.这其中包括了对周围神经损伤有确切作用的生物活性因子、药物或生物制剂,研究这些物质在改善周围神经再生的微环境的作用;另外为了防止周围神经支架材料的延迟血管化导致长段神经缺损修复后中央区坏死,从而出现纤维组织增生、移植材料塌陷和轴突再生延迟等问题,研究周围神经再生血管化规律和加速促进支架材料的再血管化的方法,以便通过促进血管化的方法间接加速神经轴突再生;同时在拓展支架来源和异种材料替代上进行积极的探索,对去细胞猪神经替代材料的制备、形态结构、产品标准和动物实验进行相关研究.通过以上不同的方法研发各种类型的修复材料,以适应各种不同的临床情况,达到个体化治疗,提高神经缺损修复疗效.
  • 摘要：目的:组织工程化心肌组织移植可修复大鼠心肌梗死.应用微电极阵标测技术分析心肌细胞与胶原材料复合组织工程再造心肌移植心肌梗死大鼠的心肌电生理特性.rn 方法:将成年SD大鼠随机分组:假手术组、模型组、移植组.后2组制作心肌梗死动物模型,假手术组仅开胸不结扎冠状动脉,移植组造模后移植心肌细胞与胶原材料复合组织.应用微电极阵标测技术记录心室肌场电位振幅,激活-恢复时间及激动传导时间.rn 结果与结论:①心室肌场主波振幅:与模型组相比，移植组梗死区、对立区及周围区部位增高(P＜0.05)。②激活-恢复时间:模型组与移植组梗死区与梗死周边区均明显延长，且梗死周边区小于梗死区(P＜0.05)。与模型组相比，移植组梗死区、对立区及周围区部位激活-恢复时间缩短(P＜0.05)。③心室前壁激动传导时间:移植组高于假手术组，但低于模型组(P＜0.05)。表明移植的心肌细胞/胶原复合体能改善心肌梗死大鼠心室肌收缩功能及电传导时间，部分修复心脏功能。
  • 摘要：相比于其他生物材料或人工材料,骨骼肌作为一种自体组织具有良好的生物相容性以及能够促进神经再生的结构和成分,但是其合理有效的应用仍有待进一步探讨.本研究旨在探讨能否使用带骨骼肌纤维的肌外膜薄片卷曲制备成中空的神经导管,并有效修复周围神经缺损.为此,尝试应用显微外科技术将CAG-EGFP转基因小鼠的腹外斜肌制备成具有管腔结构的神经导管(即AMT),桥接修复野生型小鼠5mm坐骨神经缺损.手术后8周和12周,分别对再生的神经组组织进行系统的组织学及功能学方面的评测.结果显示，AMT能够有效地修复小鼠坐骨神经缺损，且在各方面均明显优于人工材料导管组的修复效果，但是在某些指标上仍逊色于自体神经移植。此外，实验还发现来源于AMT的部分细胞成分迁移进入再生神经区域并参与再生神经结构的重建。本研究证实了自体肌源性组织制备的中空导管可以作为理想的神经导管用于周围神经缺损的修复，并且移植物中的细胞成分参与了神经再生及其结构重塑，为临床急诊一期修复神经缺损提供了一个可选择的方法。

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