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凉润通络方对糖尿病胃肠病变大鼠全血COHb含量及胃窦HO-2表达的影响

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摘要

前言

材料与方法

1 材料

2 方法

3 统计学分析

结果

1 动物脱落情况

2 大鼠一般情况

3 血糖情况

4 大鼠体重情况

5 大鼠摄食情况

6 大鼠血脂情况

7 大鼠胃肠推进率的比较

8 大鼠全血COHb含量的比较

9 胃窦组织HO-2免疫组化染色结果

10 胃肠推进率、COHb含量及HO-2水平与血糖的相关性分析

附图

附表

讨论

1 糖尿病胃肠病变大鼠模型的建立

2 凉润通络法则的提出及方药的组成

3 CO、HO-2与糖尿病胃肠病变的关系

4 凉润通络方对糖尿病胃肠功能的改善

5 本实验结果显示凉润通络方能够改善糖尿病胃肠动力功能障碍

结论

参考文献

综述

致谢

个人简历

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摘要

目的:
　　 糖尿病胃肠病变是糖尿病常见的慢性并发症，具有发病率高、病变范围广等特点，它不仅影响饮食物的消化吸收及降糖药物的药代动力学效力，造成血糖难以控制，而且影响患者的远期预后。祖国医学认为糖尿病属于“消渴”范畴，我们根据其阴虚燥热血瘀的基本病机，提出凉润通络方，临床功效显著。本研究旨在复制糖尿病胃肠病变大鼠模型的基础上，测量胃肠推进率证实凉润通络方能够改善胃肠动力功能障碍;通过检测全血碳氧血红蛋白(Carbon and oxygen hemoglobin COHb)含量及胃窦组织血红素氧合酶-2(Heme oxygenase-2，HO-2)蛋白阳性表达情况，探讨凉润通络方通过保护胃肠道神经系统改善胃肠道功能的可能机制。
　　 方法:
　　 封闭群健康无菌级成年雄性Wistar大鼠50只，180-220g，适应性喂养4天，随机选取6只作为空白对照组(N)。将STZ溶液按55mg/Kg体重复制糖尿病大鼠模型，模型稳定后将其随机分为模型组(DM)、甲钴铵组(X)、凉润通络中剂量组(Z)及凉润通络高剂量组(G)各11只。成模后不予降糖药物治疗。普通饲料喂养，第5周起分别予生理盐水、甲钴铵溶液、中剂量凉润通络方、高剂量凉润通络方灌胃。12周后停药，禁食24小时测胃肠推进率;取股动脉血检测全血COHb含量;取胃窦组织，免疫组化检测HO-2蛋白阳性表达情况。
　　 结果:
　　 1、动物脱落情况:44只Wistar大鼠注射STZ后有2只造模未成功，实验过程中3只大鼠死亡，共5只大鼠脱落于实验。
　　 2、大鼠一般情况:与空白对照组大鼠相比，糖尿病组大鼠一般状况较差。糖尿病大鼠12周时，凉润通络方高剂量组大鼠一般状况明显优于糖尿病其它组别。
　　 3、血糖情况:与空白对照组相比，糖尿病各组各时间段血糖明显增高（P＜0.01），糖尿病各组各时间段血糖无明显差异(P＞0.05）。
　　 4、大鼠体重情况:与空白对照组相比，糖尿病大鼠各组各时段体重下降明显（P＜0.01）。与模型组相比，治疗组体重6周略下降，无统计学意义(P＞0.05);12周时治疗组体重明显增高，有统计学差异(P＜0.01），各组间体重无明显差异（P＞0.05）。
　　 5、大鼠摄食情况:与空白对照组相比，糖尿病大鼠1周、4周摄食量明显增加（P＜0.01）;6周、12周摄食量减少(P＜0.05、P＜0.01)。与模型组相比，治疗组1周、4周、6周摄食量无明显变化(P＞0.05）;12周时治疗组摄食量增加（P＜0.01）。与西药组相比，凉润通络中剂量组摄食量无明显变化(P＞0.05）;高剂量组12周时增加(P＜0.05）。两中药组相比，12周时高剂量组摄食量高于中剂量组（P＜0.05）。
　　 6、大鼠血脂情况:各组大鼠血TC、TG、HDL、LDL无明显差异，无统计学意义(P＞0.05）。
　　 7、大鼠胃肠推进率的比较:12周时与空白对照组相比，糖尿病大鼠胃肠推进率降低(P＜0.01）。与模型组比较，治疗组胃肠推进率增高(P＜0.05）。与西药组相比，凉润通络中剂量组胃肠推进率无明显变化(P＞0.05），高剂量组胃肠推进率增高(P＜0.05）。两中药组相比胃肠推进率无明显变化(P＞0.05)。
　　 8、大鼠全血COHb含量的比较:12周时与空白对照组相比，糖尿病大鼠全血中COHb含量降低(P＜0.01）。与模型组比较，治疗组COHb含量升高(P＜0.05）。与西药组相比，凉润通络中剂量组COHb含量无明显变化（P＞0.05）;高剂量组COHb含量明显升高(P＜0.05)。两中药组相比，COHb含量无明显变化(P＞0.05）。
　　 9、胃窦组织HO-2免疫组化染色结果
　　 9.1、形态学观察:染色组织定位于大鼠胃窦组织粘膜层细胞质中，着色处可见大小不等的浅黄、深黄至棕黄色颗粒。细胞核为阴性，阴性结果为:无着色。与空白对照组相比，糖尿病大鼠免疫组化图片着色浅、密度小。与模型组相比，治疗组着色深、密度高。三个治疗组中，凉润通络高剂量组着色深、密度高，西药组与凉润通络中剂量组着色浅、密度小，二者无明显差别。
　　 9.2、平均光密度值测定结果:与空白对照组比较，糖尿病大鼠平均光密度值降低(P＜0.01）。与模型组比较，治疗组平均光密度值升高(P＜0.05）。与西药组相比，凉润通络中剂量组平均光密度值无明显变化（P＞0.05）;高剂量组平均光密度值增高（P＜0.05）。两中药组相比，高剂量组平均光密度值增高(P＜0.01）。
　　 10、血糖与胃肠推进率、全血COHb含量及胃窦HO-2蛋白阳性表达呈负相关。
　　 结论:
　　 1、采用STZ进行一次性腹腔注射复制糖尿病大鼠模型，糖尿病模型成功且稳定。
　　 2、糖尿病大鼠12周时摄食量减少，胃肠推进率下降，全血COHb含量明显降低，胃窦HO-2蛋白阳性表达降低，故推测CO-HO系统与糖尿病胃肠病变关系密切。
　　 3、糖尿病胃肠病变当属“消渴”变证，针对其阴虚燥热血瘀的病机，治则当滋阴清热活血，我们提出凉润通络方，本实验结果表明:凉润通络方能明显改善糖尿病大鼠一般状态，增加其摄食量、体重，促进其胃肠推进率，升高其全血COHb含量及胃窦组织HO-2蛋白阳性表达，且功效优于甲钴铵。凉润通络方改善胃肠道功能的机制可能来源于对胃肠道抑制性神经递质CO及其唯一限速酶HO-2的保护作用，且其作用机制并非来源于对血糖的控制。
　　 4、凉润通络方为复方制剂，作用靶点广，有可能通过提高胃肠道神经递质的含量达到改善糖尿病大鼠胃肠功能的功效。

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