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食管鳞状细胞癌患者外周血中循环肿瘤细胞的检测和临床意义

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摘要

目的：食管癌是一种常见的消化道肿瘤，5年生存率低，预后较差，有许多食管癌患者死于肿瘤的远处转移。血液中的循环肿瘤细胞(circulating tumor cell，CTC)是导致食管癌术后复发和远处转移的首要条件，因此，检测循环肿瘤细胞对判断食管癌的复发、转移及指导临床治疗上具有重要意义。上皮细胞粘附分子(epithelial cellular adhesion molecule，EP-CAM)是一类介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质之间粘附的细胞表面跨膜蛋白，在上皮来源的细胞及上皮来源的肿瘤细胞中广泛表达，在细胞间信号传递、周期调控、粘附、增殖、分化及器官形态形成和维持等方面发挥着重要作用，与肿瘤的发生、发展、转移关系密切。
　　本实验应用淋巴细胞分离法联合流式细胞技术(flow cytometry，FCM)检测食管癌患者血液中EP-CAM阳性循环肿瘤细胞的数量，采用免疫细胞化学(immunocytochemistry，ICC)方法鉴定细胞是否为肿瘤细胞，本研究目的在于探讨EP-CAM阳性循环肿瘤细胞在食管鳞癌患者手术前后、化疗前后血液中的表达差异及其表达与临床病理学特征的关系，从而探讨其检测的临床意义。
　　方法：30例食管鳞癌手术患者来自河北省人民医院胸外科、河北医科大学第四医院胸外科，2010年9月－2011年5月的食管癌患者(病理证实均为鳞状细胞癌)，于术前1天和术后1小时、10天采新鲜静脉血5ml；30例食管鳞癌非手术患者来自河北省人民医院胸外科、肿瘤科，2010年9-2011年5月的食管癌患者(病理证实均为鳞状细胞癌)，于化疗前1天和化疗5天后采新鲜静脉血5ml。10例健康志愿者外周静脉血液做对照组。分离所有实验对象血液中的单个核细胞(peripheral blood monoclonalcells，PBMCs)，经流式细胞仪检测血中CD45-Ep-CAM+循环肿瘤细胞的表达情况，应用细胞角蛋白CK19通过免疫细胞化学方法鉴定细胞为肿瘤细胞。分别测量上述所有入组实验对象外周血中CD45－Ep-CAM+循环肿瘤细胞的表达情况，分析EP-CAM阳性循环肿瘤细胞在食管鳞癌患者手术前后、化疗前后血液中的表达差异及其表达与临床病理学特征的关系。
　　统计学方法：运用统计学软件SPSS13.0对数据进行统计处理，对相关数据进行t检验、X2检验、方差分析或秩和检验，计算P值，以α=0.05为差异显著性标准，以P值<0.05判断差异有统计学意义。
　　结果：
　　1健康志愿者和食管鳞癌患者外周血中循环肿瘤细胞的检测情况：应用流式细胞术可以检测到食管鳞癌患者外周血中EP-CAM阳性循环肿瘤细胞，但是细胞数量较少。免疫细胞化学染色显示循环肿瘤细胞胞质呈棕黄色深染。10例健康志愿者血液中没有检测到EP-CAM阳性细胞，60例术前和化疗前食管鳞癌患者有5例未检测到EP-CAM阳性细胞，与对照组表达差异具有统计学意义(X2=37.507，P=0.000)。
　　2食管鳞癌患者手术前、手术后1小时和手术后10天外周血中循环肿瘤细胞的检测情况：三组间Ep-CAM阳性循环肿瘤细胞的数量存在统计学差异(F=21.573，P=0.000)，表达的数量平均值分别为：12.067±6.943(手术前)、12.100±6.630(手术后1小时)和8.433±4.576(手术后10天)，三组间手术前和手术后1小时没有统计学差别(P=0.983)，手术前和手术后10天有统计学差别(P=0.024)，手术后1小时和手术后10天有统计学差别(P=0.023)。
　　3食管鳞癌患者化疗前、后外周血中循环肿瘤细胞的检测情况：两组间EP-CAM阳性循环肿瘤细胞的表达数量存在明显的差异，表达的数量平均值分别为：18.300±3.385(化疗后)和11.067±2.518(化疗后)，两组间有统计学差异(t=19.366，P=0.000)；
　　4手术前食管鳞癌患者外周血中EP-CAM阳性循环肿瘤细胞的数量和患者病理学特征之间的关系：根据患者术后的病理学特征进行分组，分析患者外周血中EP-CAM阳性循环肿瘤细胞的数量与肿瘤大小、浸润深度、是否淋巴结转移明显相关(P<0.05)，与肿瘤的分化无统计学相关(P>0.005)。
　　5手术前食管鳞癌患者外周血中循环肿瘤细胞的数量和肿瘤分期之间的关系：根据患者肿瘤分期进行分组，两组间EP-CAM阳性循环肿瘤细胞的表达数量存在明显的差异，表达的数量平均值分别为：7.938±6.126(Ⅱ期)和16.786±4.388(Ⅲ期)，有统计学差异(Z=-3.655，P=0.000)。
　　结论：
　　1通过Ep-CAM检测可以发现食管鳞癌患者外周血中的循环肿瘤细胞。
　　2手术操作短期内不影响食管鳞癌患者循环肿瘤细胞的数量，较长时间后可使食管鳞癌患者循环肿瘤细胞的数量下降。
　　3化疗可减少血液循环中食管鳞癌细胞的数量。
　　4外周血中循环肿瘤细胞的数量与肿瘤病理分期明显相关，肿瘤分期越晚，循环肿瘤细胞的数量越多。

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