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微环境诱导iPSCs和BMSCs向神经元样细胞分化——Reelin对细胞分化和极性化的调节作用

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引言

1仪器材料与实验方法

1.1仪器与材料

1.1.1实验仪器

1.1.2试剂耗材

1.1.3试剂配方

1.2实验方法

1.2.1 BMSCs提取与鉴定

1.2.2 iPSCs的培养

1.2.3细胞脑片共培养

1.2.4细胞-脑匀浆上清共培养

1.2.5免疫细胞化学标记神经元

1.3统计学处理

2实验结果

2.1脑片微环境对iPSCs和BMSCs分化和极性化的作用

2.1.1对照组

2.1.2与WT小鼠脑片共培养

2.1.3与reeler小鼠脑片共培养

2.2脑匀浆上清对iPSCs和BMSCs向神经元分化的影响

2.2.1对照组

2.2.2与WT小鼠脑匀浆上清共培养

2.2.3与reeler小鼠脑匀浆上清共培养

3讨论

3.1脑片微环境对干细胞片层化形成和极性发生的诱导作用

3.2脑匀浆上清可诱导干细胞向神经元分化

3.3 Reelin对细胞极性产生及分化具有一定的调控作用

4结论

参考文献

文献综述:-Reelin调控神经元迁移和突触发育研究进展

附录

附录A 缩略语表

附录B 攻读学位期间发表学术论文目录

致谢

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摘要

目的:研究小鼠诱导性多能干细胞(induced pluripotentstem cells, iPSCs)和小鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)在大脑微环境的诱导下向神经元样细胞分化的过程;尤其是探讨细胞极性的关键分子Reelin蛋白对干细胞分化的影响。
  方法:将iPSCs和BMSCs分别与WT和Reelin缺失小鼠(reeler小鼠)的海马脑片以及两种小鼠的脑匀浆上清共培养,观察二者在脑片微环境下的细胞分化和极性化改变,揭示Reelin蛋白对细胞分化和极性化的影响。
  结果:与WT和Reeler小鼠脑片共培养的 iPSCs和BMSCs均出现神经元样细胞的分化。二者在WT小鼠海马脑片呈双C字型海马片层化分布,同时表现出很强的方位性;而与reeler小鼠海马脑片共培养的细胞分布则无明显规律性,呈均匀分布。此外,与脑匀浆上清培养基共培养的 iPSCs和BMSCs,在共培养72小时后,部分类神经元样细胞可以被神经干细胞标记物(Nestin)和神经元特异标记物(NeuN)所标记,表明他们可以分化成为功能性神经元。且在共培养初期reeler微环境培养基中神经元分化和突起生长相对滞后。
  结论:在大脑微环境的诱导下,iPSCs和BMSCs可以向神经元样细胞,甚至功能性神经元分化,Reelin蛋白参与了细胞极性化过程,Reelin缺乏可造成神经细胞极性紊乱,并对神经元分化及突起生长有一定影响。

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