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【6h】

五苓散对水负荷大鼠利尿作用及与水通道蛋白-1相关性的初步研究

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目录

缩略语

摘要

前言

文献综述

1、水液代谢国内外研究概况

1.1 传统中医学水液代谢概述

2、现代医学对水液代谢的概述

2.1 神经系统的调节

2.2 抗利尿激素的调节

2.3 醛固酮系统的调节

2.4 心钠素的调节

3、五苓散实验研究进展

3.1 五苓散的利尿作用

3.2 五苓散的双向调节作用

3.3 五苓散对肾的影响

3.4 五苓散对血压调节作用

4、五苓散临床研究现状

4.1 泌尿疾病

4.2 胃肠疾病

4.3 循环疾病

4.4 其他疾病

5、五苓散各单昧药的研究进展

5.1 桂枝

5.2 茯苓

5.3 猪苓

5.4 白术

5.5 泽泻

6.2 水通道蛋白-1表达因素的影响

6.3 水通道蛋白-1的实验研究应用

7、五苓散与水通道蛋白的相关性研究

8、课题设计

实验研究

1、实验目的

2、实验材料

2.1 实验动物

2.2 实验主要试剂

2.3 实验主要仪器

3、实验方法

3.1 实验分组

3.2 五苓散制备与剂量确定

3.3 水负荷模型制备

3.4 大鼠血浆制备、肾脏摘取与保存

4、实验指标观察

4.1 大鼠尿量变化

4.2 通过EUSA法检测大鼠血浆ANP水平变化

4.3 通过ELISA法检测大鼠肾脏AQP-1浓度

4.5 逆转录-PCR法检测大鼠肾脏AQP-1mRNA表达

4.6 大鼠肾脏总RNA提取前相关准备

4.7 蛋白免疫印迹法检测大鼠肾脏AQP-1蛋白表达

5、统计学方法

6、结果

6.1 各组大鼠尿量的比较情况

6.2 各组大鼠血浆ANP水平变化比较

6.3各组大鼠肾脏APQ-1浓度变化比较

6.4 免疫组化法检测大鼠肾脏AQP-1表达

6.5 反转录-PCR检测大鼠肾脏AQP-1mRNA表达

6.6 Western-Blot检测大鼠肾脏AQP-1蛋白表

7、讨论

7.1 关于五苓方制剂与使用剂量的讨论

7.2 关于大鼠用于利尿实验的筛选探讨

7.3 五苓散对水负荷大鼠血浆ANP水平的影响

7.4 五苓散对水负荷大鼠肾脏AQP-1的影响

结论

致谢

参考文献

声明

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个人简历

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摘要

目的:
  通过对SPF级雄性大鼠进行生理盐水灌胃制备经典水负荷模型,观察五苓方散剂对其利尿作用及对该作用与水通道蛋白1(AQP-1)的相关性进行初步探讨。
  方法:
  将40只雄性大鼠随机分为5组,每组8只:正常组(NG)、五苓散低剂量组(WLS-L)、五苓散等效剂量组(WLS-M)、五苓散高剂量组(WLS-H)与呋塞米组(Fur-g),正常组给予等体积生理盐水(8.0ml)灌胃,五苓散各剂量从低到高组依次灌胃浓度为0.13g/Kg、0.26g/Kg、0.52g/Kg,确定药量后并稀释于8ml生理盐水进行灌胃,阳性对照组给予8ml(浓度1.0mg/ml)的呋塞米灌胃,用代谢笼装置测定各组大鼠每个时间点(1h、2h、4h、6h、8h、24h)尿液量,检测各组大鼠心钠素(ANP)水平,实验结束后摘取大鼠肾脏并对其应用免疫组化技术、RT-PCR、Western Blot对大鼠肾脏水通道蛋白1蛋白及mRNA的表达情况进行检测与分析。
  结果:
  1、通过对大鼠24h总尿液量的测量,发现与NG组表较,WLS-L、WLS-H组24h总尿量变化无统计学意义,而WLS-M组及Fur-g组24h尿量变化存在明显差异(P<0.05);与Fur-g组比较,WLS-M组24h尿量变化无差异性(P>0.05)。
  2、通过对各组大鼠在给药后相应时间点(1h、2h、4h、6h、8h)尿量测量分析,各实验组(WLS-L组、WLS-M组、WLS-H组、Fur-g组)随时间变化各时间点尿量逐渐增加,但各组增加水平幅度不一致。与NG组比较,WLS-M组在大鼠给药后2h、4h、6h各时间点尿量存在显著性差异(P<0.05),Fur-g组在给药后1h、2h、4h各时间点有统计学意义(P<0.05),而WLS-L、WLS-H组在给药后1h、2h、4h、6h、8h等各时间点尿量均无统计学意义。
  3、通过应用ELISA法检测大鼠血浆ANP水平发现,与NG比较,WLS-M、WLS-H组大鼠肾脏AQP-1浓度明显上升,阳性对照组Fur-g组大鼠AQP-1水平上升,有统计学意义(P<0.05),与阳性对照组Fur-g比较,WLS-M、WLS-H大鼠肾脏AQP-1浓度无显著差异性。
  4、通过采用ELISA法测量大鼠肾脏AQP-1浓度发现与NG比较,与NG比较,WLS-L、WLS-H组大鼠肾脏AQP-1浓度无统计学意义(P>0.05),WLS-M、Fur-g组大鼠AQP-1浓度降低,存在明显差异性,有统计学意义(P<0.05),与Fur-g比较,WLS-M组大鼠肾脏AQP-1浓度有无显著差异性。
  5、通过应用免疫组化、RT-PCR、Western Blot技术对大鼠肾脏AQP-1蛋白、mRNA检测,表明AQP-1主要分布在肾脏近端小管上皮细胞膜上,经图像软件分析各区域密度灰值可知,与NG组比较,WLS-M组AQP-1蛋白及mRNA表达均下调,具有统计学意义(P<0.05)。
  结论:
  1.五苓方散剂对经典水负荷模型大鼠具有利尿作用,且五苓散等效剂量组利尿效果最显著。
  2.五苓方散剂对水负荷大鼠的利尿作用可能与大鼠血浆ANP水平变化存在一定相关性。
  3.五苓方散剂对水负荷大鼠利尿作用可能与肾脏AQP-1有关,其利尿作用可能通过下调肾脏AQP-1mRNA表达水平实现的。

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