抗抑制性木聚糖酶Xyn1B抗性结构基础及抗性酶应用试验

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摘要

1 文献综述

1．2 木聚糖酶

1．2．1 木聚糖酶的来源

1．2．2 木聚糖酶的分类

1．2．3 木聚糖酶的结构、性质和底物特异性

1．2．4 木聚糖酶的催化机理

1．2．5 木聚糖酶的应用

1．3 木聚糖酶抑制蛋白

1．3．1 TAXI型抑制蛋白

1．3．2 XIP型抑制蛋白

1．3．3 TLXI型抑制蛋白

1．3．4 木聚糖酶抑制蛋白在植物生长过程中的作用

1．3．5 木聚糖酶抑制蛋白对木聚糖酶应用领域的影响

2 引言

3 材料与方法

3．1．2 溶液和试剂

3．1．3 培养基

3．1．4 应用试验材料

3．1．5 实验仪器

3．2 实验流程

3．3 建模方法

3．4．2 聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因

3．4．3 PCR产物的纯化与连接

3．4．4 重组质粒pET20b-Xyn1B模板的消解与转化

3．4．5 木聚糖酶基因在E．coli BL21(DE3)中的表达及粗酶液制备

3．4．6 XIP-Ⅰ在毕赤酵母中的表达检测

3．4．7 蛋白的纯化

3．4．8 酶学性质分析

3．5 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳

3．6 还原糖标准曲线的测定

3．7 蛋白标准曲线的测定

3．8 Xyn1B对麦芽汁制备过程中大麦芽糖化的影响

4 结果与分析

4．1．1 Xyn1B的一级结构

4．1．2 Xyn1B的三级结构模拟

4．2 Xyn1B的thumb结构区域改造

4．2．2 XIP-Ⅰ对突变体GGS、GGE、GSE、GTS抗抑制活性的检测

4．2．3 Xyn1B的Qing、TA突变体重组质粒的构建及表达、纯化

4．2．4 突变体Qing、TA的抗抑制活性的检测

4．3 palm结构区域的改造

4．3．1 Xyn1B的B384、B485突变体的重组质粒的构建及表达

4．3．2 突变体B384、B485抗抑制活性的检测

4．4 Xynl B的活性位点区域的改造

4．5．2 Xyn1B与突变体酶的最适pH的测定

4．5．3 Xyn1B与突变体酶的温度稳定性的测定

4．5．4 Xyn1B与突变体酶的pH稳定性的测定

4．5．5 Xyn1B与突变体酶的酶促动力学

4．6 抗抑制性木聚糖酶Xyn1B对麦芽糖化效果的影响

4．6．2 抗性酶Xyn1B对麦芽汁澄清度的影响

5．1 结论

5．2 讨论

参考文献

附录