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河南省部分地区奶牛贾第虫病流行病学调查及分离株分子特征研究

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贾第虫病是一种重要的人兽共患寄生性原虫病,主要通过水、食物、“人-动物”或“人-人”接触传播,可引起宿主的腹泻及吸收障碍等症状。近年来,国外陆续报道奶牛中贾第虫的感染率很高,尤其是乳牛,感染率甚至可达100％,并且有些学者认为牛也是贾第虫病水源性暴发的重要病原来源之一。从2008年9月到2009年11月,应用醛醚沉淀法和卢戈氏碘液染色法两种实验室检测方法对河南省5个地区11个奶牛场的奶牛贾第虫感染情况进行了调查,并对郑州某场奶牛贾第虫的季节动态进行了长达一年多的持续研究,应用基于TPI基因的巢氏PCR方法对奶牛贾第虫进行了种类鉴定和种系发育研究。
　　 1.为了解河南省部分地区奶牛贾第虫的感染情况和流行特征,于2008年9月至2009年11月,应用醛醚沉淀法和卢戈氏碘液染色法对河南省郑州、新乡、洛阳和焦作、商丘5个地区11个奶牛场的奶牛贾第虫病的流行情况进行了调查。经醛醚沉淀法除脂,卢戈氏碘液染色后,镜检可观察到奶牛贾第虫包囊的形状为卵圆形,囊壁较厚。卢戈式碘液染色后囊壁不着色；虫体呈棕黄色或黄绿色,囊壁与虫体之间有明显的空隙,未成熟的包囊具有2个核,成熟的包囊有4个核。胞质内可见轴柱和鞭毛的早期结构。滋养体形似纵切、倒置的半个梨形。测量126个奶牛贾第虫包囊,其大小为7.5～9μm×10～14μm。共采集2137份奶牛粪便样品,发现189份奶牛粪样贾第虫呈阳性,总感染率为8.84％。年龄范围从出生几天到12月龄以上不等,结果分析发现,0～5月龄的奶牛贾第虫感染率较高,达11.29％1而6～12月龄奶牛感染率相对较低,为1.44％；12月龄以上奶牛感染率仅为0.29％；其中以4～5月龄的感染率最高,为15.70％。不同年龄段奶牛贾第虫感染率存在非常显著的差异。同时为了解河南省奶牛贾第虫病的季节动态,对郑州地区某场奶牛的贾第虫感染情况进行了长达一年多的跟踪监测。研究发现,奶牛贾第虫的感染率与感染强度不仅和奶牛年龄、地区及饲养条件有很大关系,而且很可能与季节有一定的关系,经调查研究与数据统计分析表明,2月份的感染率最高,达17.89％;6月份的感染率最低,仅为2.36％,证实确实存在一定的规律。
　　 2.为掌握牛源贾第虫的遗传特征,对查获的189份奶牛贾第虫阳性样品选择具有地区代表性的104份样品进行基于TPI基因的巢氏PCR特异性扩增,共有93份牛源贾第虫阳性样品扩增出特异性产物,产物序列长度均为530bp。
　　 3.为从种系发育关系鉴定河南省部分地区牛源贾第虫分离株的种类及基因型,对扩增出的93个牛源贾第虫分离株的序列进行测序,并用Blast在NCBI等核酸序列数据库进行同源序列搜索,应用Clustal X1.81等生物学软件对序列进行比对、构建分子进化树以及同源性分析,结果表明,所研究的93个分离株均属于贾第虫不同的基因型,但序列之间存在差异性,其中5个分离株属于聚集体A,2个分离株属于聚集体B,86个分离株属于聚集体E。该结果提示,在贾第虫内部存在不同的基因型或基因亚型。
　　 奶牛贾第虫病是重要的人兽共患原虫病之一,因此,研究奶牛贾第虫病具有重要的公共卫生意义。奶牛贾第虫病的研究国内除肖淑敏、李国清等首次从广东某奶牛场分离到一株牛源贾第虫并进行相关的研究外尚未见到其他文献报道,因此,本研究结果为进一步研究奶牛贾第虫病的分子流行病学、生物学特性及虫株之间的种系进化关系等提供了重要的参考依据。

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