嗜热古菌高温酸性α-淀粉酶基因BD5088的体外诱变及其突变体在大肠杆菌中的表达和酶学性质研究

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第一部分 文献综述

1.1 α-淀粉酶概述

1.1.1 α-淀粉酶的发现和分类

1.1.2 α-粉酶的作用机理

1.1.3 产生α-淀粉酶的微生物主要种类及其性质

1.1.4 α-淀粉酶基因的结构特点

1.1.5 α-淀粉酶的一般性质

1.1.6 α-淀粉酶分子水平上的研究

1.1.7 α-淀粉酶的主要用途

1.1.8 耐高温α-淀粉酶的研究进展

1.2 体外诱变(定向进化)

1.2.1 体外诱变的含义

1.2.2 酶的体外诱变

1.2.3 体外诱变的研究进展

1.2.4 依赖PCR的体外诱变策略

1.3 基因表达技术的研究概况

1.3.1 基因表达的基本概念及特点

1.3.2 基因表达技术的方法

第二部分 材料与方法

2.1 实验材料与仪器

2.1.1 菌株和质粒

2.1.2 培养基

2.1.3 用于多位点定点诱变的引物

2.1.4 酶和试剂

2.1.5 实验用溶液的配制

2.1.6 仪器和设备

2.2 实验方法

2.2.1 定点突变引物的设计

2.2.2 PCR介导的多位点定点饱和突变

2.2.3 大肠杆菌感受态细胞的制备

2.2.4 大肠杆菌的快速转化

2.2.5 大肠杆菌的常规转化

2.2.6 初步筛选酶活改变的突变体

2.2.7 突变酶蛋白的诱导表达

2.2.8 细胞的裂解--超声波破碎

2.2.9 SDS-PAGE检测表达蛋白

2.2.10 突变酶的酶活性测定

2.2.11 突变酶的酶学性质

第三部分 结果与分析

3.1 重组酶的筛选和鉴定

3.1.1 PCR介导的多位点定点饱和突变扩增突变基因全长

3.1.2 突变体的筛选

3.2 突变重组子分析

3.3 突变体所产α-淀粉酶活性的测定

3.4 突变体的表达

3.5 突变体所产α-淀粉酶的酶学性质研究

3.5.1 Mut1，Mut2,Mut3所产α-淀粉酶的酶学性质研究

3.5.2 Mut5，Mut6所产α-淀粉酶的酶学性质研究

3.5.3 Mut7所产α-淀粉酶的酶学性质研究

第四部分 讨论

4.1 突变体库的建立

4.2 突变库的筛选

4.3 外源蛋白高效表达的影响因素

4.4 基因进化分析

参考文献

致 谢