极端嗜热菌Thermus thermophilus HB27中腺苷酸激酶在大肠杆菌中的表达、纯化及酶学性质研究

谭志文; 刘俊; 张学芳; 孟凡国; 张耀洲

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目的克隆Thermus thermophilus HB27隆腺苷酸激酶基因并在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达并获得了比较高的表达量并对其酶学性质进行分析.方法利用PCR技术从Thermus thermophilus HB27基因组中扩增得到腺苷酸激酶的基因片段,将其克隆到pET-28a表达载体上,以PCR酶切和测序进行鉴定.利用光谱分析测定该重组酶的相关酶学性质.结果成功克隆和高效表达了腺苷酸激酶;重组酶的最适pH是8.5,最适温度是90℃.重组酶对底物ADP的米氏常数Km是68.6 μmol/L,V_(max~(ADP))为0.294 mmol/(L~(-1)·min~(-1)).将该重组酶在70、80、90、100℃下分别作用7 h后,发现仍具有酶活性.显示出高的温度耐受性.腺苷酸激酶的特异性抑制剂AP5A浓度为2.0 mmol/L能够抑制重组腺苷酸激酶70%的酶活性,AP5A对重组腺苷酸激酶的抑制类型为竞争性抑制,其抑制常数为46.39 μmol/L.结论成功克隆、表达重组腺苷酸激酶,为腺苷酸激酶的进一步应用奠定了基础.

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来源
《南方医科大学学报》 |2010年第1期|1-6|共6页
作者
谭志文; 刘俊; 张学芳; 孟凡国; 张耀洲;
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作者单位

浙江理工大学生物化学研究所,浙江,杭州310018;

浙江理工大学生物化学研究所,浙江,杭州310018;

浙江理工大学生物化学研究所,浙江,杭州310018;

浙江清华长三角研究院应用酶学重点实验室,浙江,嘉兴314006;

浙江理工大学生物化学研究所,浙江,杭州310018;

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正文语种 chi
中图分类酶工程;
关键词
腺苷酸激酶; Thermus thermophilus HB27; 酶学性质;

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