膜荚黄芪不定根培养及苯丙氨酸解氨酶(PAL)基因的克隆与功能鉴定

摘要

1 绪论

1．1 黄芪研究概述

1．1．1 化学成分

1．1．2 药理作用

1．1．3 栽培技术

1．1．4 种质资源和育种

1．2 生物反应器在植物组织培养中的应用

1．2．1 植物细胞培养

1．2．2 植物器官培养

1．3 PAL研究进展

1．3．1 PAL分布与定位

1．3．2 PAL酶学性质

1．3．3 PAL对植物生理代谢的意义

1．3．4 PAL与人体抗病作用

1．3．5 PAL在食品、医疗领域中的作用

1．3．6 PAL的调控

1．3．7 PAL分子生物学研究进展

1．3．8 PAL研究展望

1．4 本研究的目的和意义

2 膜荚黄芪不定根培养研究

2．1 材料与方法

2．1．1 材料

2．1．2 试验方法

2．2 结果与分析

2．2．1 膜荚黄芪不定根生长的培养基条件的筛选

2．2．2 培养方法对膜荚黄芪不定根生长的影响

2．2．3 影响膜荚黄芪不定根在生物反应器内生长的因素

2．2．4 有效成分分析

2．3 讨论

2．4 本章小结

3 膜荚黄芪苯丙氨酸解氨酶基因克隆及序列分析

3．1 材料与方法

3．1．1 试验材料

3．1．2 方法

3．2 结果与分析

3．2．1 膜荚黄芪PAL基因经RT-PCR合成部分cDNA

3．2．2 膜荚黄芪PAL基因的3'-RACE结果

3．2．3 膜荚黄芪PAL基因的5'-RACE结果

3．2．4 膜荚黄芪PAL基因编码序列的扩增

3．2．5 膜荚黄芪PAL基因的生物信息学分析

3．2．6 膜荚黄芪基因组Southern杂交

3．3 讨论

3．4 本章小结

4 AmPAL基因的重组蛋白在E．coli M15中的表达和纯化

4．1 材料与方法

4．1．1 材料

4．1．2 方法

4．2 结果与分析

4．2．1 原核表达载体PQE30-AmPAL构建和转化

4．2．2 重组融合蛋白在E．coli M15中的表达

4．2．3 重组融合蛋白6 X His-AmPAL的纯化和酶活性测定

4．3 讨论

4．4 本章小结

5 AmPAL基因转拟南芥研究

5．1 材料与方法

5．1．1 材料

5．1．2 方法

5．2 结果与分析

5．2．1 植物表达载体的构建和鉴定

5．2．2 植物表达载体的农杆菌转化及鉴定

5．2．3 拟南芥的遗传转化

5．2．4 转基因拟南芥植株的分子鉴定

5．3 讨论

5．4 本章小结

结论

参考文献

附录

攻读学位期间发表的学术论文

致谢

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